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 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
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질문 exosome BCA 정량을 하려고 하는데요.
뒷다리나는연구자(일반인)  | 01.19 20:13

안녕하세요.

exosome을 western을 하기 위해 BCA 정량을 진행했습니다. 

exosome을 우선 protein으로 lysis를 해야 하잖아요.

그래서 ripa 5ul + exosome 5ul를 넣고 ice에서 30분

진행한뒤, BCA정량을 진행했습니다. 

(혹시나 싶어서 ripa를 넣은 샘플과 넣지않은 샘플 둘다 측정을 진행했습니다.)

그런데 ripa로 lysis한 농도값이랑 그냥exosome을 넣은 농도값이 

비슷하게 나옵니다. 그럼 lysis가 안된거라 생각해야 하나요?

둘다 OD값이 대략 0.1483 정도 나왔습니다.

(양이 작으니 그건 감안해주세요.)

 

혹시 exosome을 protein으로 인지하는건가요?ㅜㅠ

도와주세요.. 감사합니다.

#exosome
 
#BCA
 
#lysis
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  01.19 21:40  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

양이 너무 적어서 판단하기 힘들지만 BCA가 detection하는 a.a의 residues가

exosome 표면 단백질에도 있기 때문에 lysis하지 않아도 측정됩니다.

양이 많으면 sonication 후 lysis하면 확실하게 lysis됩니다만 양이 적으니

RIPA 처리 후 37도 10분과 exosome 자체를 한번 비교해 보세요.

 

뒷다리나는연구자  |  01.19 21:46  
리파넣은것과 안넣은것 둘다
Ice 30분후 인큐베이션 15분 진행을 하긴 했는데,
저렇게 나왔습니다.
Sonication 이 없어서 어떻게 해야할지 난감합니다ㅜ
대왕개구리SPEED  |  01.19 21:57  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

Blank, -RIPA, +RIPA는 어느정도 값이 나왔나요?

뒷다리나는연구자  |  01.19 22:22  
Blank 0.0486
-ripa 0.2174 (exosome 5ul)
+ripa 0.1483 (exosome 2.5ul +ripa2.5ul)
로 나왔습니닷.
대왕개구리SPEED  |  01.19 22:39  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

-ripa 0.1688, +ripa 0.248이네요.

-ripa는 membrane protein, +ripa는 membrane protein + inner protein이기

때문에 양이 적지만 lysis된 것으로 봐야할것 같습니다.

참고로 이런 2종류 정량은 BNK도 2종류로 하면 좀더 정확한 BNK값의 보정이

가능합니다.

뒷다리나는연구자  |  01.19 23:15  
감사드립니다. 내일 한번 웨스턴해볼게요^^
근데 Bnk를 두종류로 하라고 하심이.. 어떤의미인지 한번만더 여쭈어봐도 될까요?
대왕개구리SPEED  |  01.19 23:32  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
-ripa bnk : exosome 용매
+ripa bnk : exosome 용매 + ripa
뒷다리나는연구자  |  01.19 23:36  
아, 용매는 pbs였습니다.
감사합니다. 정말 도움이 많이 되었습니다:)
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