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양이 너무 적어서 판단하기 힘들지만 BCA가 detection하는 a.a의 residues가
exosome 표면 단백질에도 있기 때문에 lysis하지 않아도 측정됩니다.
양이 많으면 sonication 후 lysis하면 확실하게 lysis됩니다만 양이 적으니
RIPA 처리 후 37도 10분과 exosome 자체를 한번 비교해 보세요.
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레벨4
나는연구자
(일반인)
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21.01.19 21:46
리파넣은것과 안넣은것 둘다
Ice 30분후 인큐베이션 15분 진행을 하긴 했는데,
저렇게 나왔습니다.
Sonication 이 없어서 어떻게 해야할지 난감합니다ㅜ
Blank, -RIPA, +RIPA는 어느정도 값이 나왔나요?
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레벨4
나는연구자
(일반인)
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21.01.19 22:22
Blank 0.0486
-ripa 0.2174 (exosome 5ul)
+ripa 0.1483 (exosome 2.5ul +ripa2.5ul)
로 나왔습니닷.
-ripa 0.1688, +ripa 0.248이네요.
-ripa는 membrane protein, +ripa는 membrane protein + inner protein이기
때문에 양이 적지만 lysis된 것으로 봐야할것 같습니다.
참고로 이런 2종류 정량은 BNK도 2종류로 하면 좀더 정확한 BNK값의 보정이
가능합니다.
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레벨4
나는연구자
(일반인)
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21.01.19 23:15
감사드립니다. 내일 한번 웨스턴해볼게요^^
근데 Bnk를 두종류로 하라고 하심이.. 어떤의미인지 한번만더 여쭈어봐도 될까요?
-ripa bnk : exosome 용매
+ripa bnk : exosome 용매 + ripa
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레벨4
나는연구자
(일반인)
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21.01.19 23:36
아, 용매는 pbs였습니다.
감사합니다. 정말 도움이 많이 되었습니다:)