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1. 가지고 있는 셀농도가 35*10^4/ml
2. 96well에는 1.5*10^4/cm^2로 깔고 싶다 그러면 96well 면적부터 구하셔야 하네요. 96well은 0.33정도라 할때 1/3 이니 0.5*10^4/well 로 깔아야 하네요.
3. 또 96well 전체를 까실려면 대략 100개 well 정도가 필요하구요
그러면 50*10^4/100well 이 필요한 셀 양이니... 가지고 있는 셀농도에서 1.42ml 그리고 빈배지 8.58ml을 혼합하고 잘 섞어 100ul 씩 씨딩하면 됩니다.
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레벨2
연구원지망생
(대학원생)
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21.01.19 16:05
제가 찾아 봤을 때, 96well 면적이 0.33cm2이었는데요ㅠㅠㅠ 제가 저번에 깔았을 때는 cell counting 값이 35*10^4여서 배운대로 1.5*10^4/35*10^4 한뒤 총 20well에 깔면 , 총 2ml(20*100ul)이기 때문에 1well을 여유분 포함해서 (1.5*10^4/35*10^4)*2.1=0.09여서 cell volume 90ul와 fresh 미디어 2.1ml까지 하여 cell을 96well에 분주하였는데 다음날 부착된 cell이 너무 적어서요ㅠㅠㅠ 계산법을 면적으로 하는 방법도 있다고 하여서 바꿀려고 하는데 너무 헷갈리네요ㅠㅠㅠ 처음부터 차근차근 설명해주실 수 있나요???
그럼 다른식으로 계산해 볼까요
일단 셀농도가 35*10^4/ml 이고
깔려는 셀은 면적이 0.33cm2 이나 well당 0.5*10^4cell/well 로 까실려고 하네요
총 까시려는 well이 20개라고 하시니 필요한 cell은 10*10^4개가 필요하세요
가지고 있는 셀이 35*10^4/ml 이니 10*10^4의 셀은 0.28ml 이고 빈배지는 1.72ml을 넣어주시고 이것을 100ul 씩 깔아주시면 되네요...
또 부족할수 있으니 10%씩 더 만든다 하면 0.308ml 과 빈배지 1.892ml을 넣어서 잘 혼합후 100ul씩 깔아주시면 2ml을 사용하고 0.2ml이 남을것입니다.
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레벨2
연구원지망생
(대학원생)
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21.01.19 16:23
저 진짜 마지막으로 질문 하나만 더 해도 될까요????
0.5*10^4 cell/well은 어떻게 계산해야 이 값이 나온건가요????? 풀어서 식으로 적어주시면 감사하겠습니다.ㅠㅠㅠㅠㅠ
아직 학부생이라 너무 헷갈리네요ㅠㅠㅠ
아직 갈길이 머네요ㅠㅠㅠ흑.......
96well에 seeding할 농도가 1.5*10^4/cm2 라고 질문하셨고
96well 면적이 0.33cm2 이니 1/3 이네요
따라서 well당은 0.5*10^4/well 이 됩니다. 1cm2에 1/3이 0.33cm2 입니다.
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레벨2
연구원지망생
(대학원생)
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21.01.19 16:51
감사합니다. 많은 도움이 되었습니다.!!