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 전체 > Cell Biology > Cell Cycle
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질문 cell cycle assay buffer 질문합니다,,(70% ethanol)
알호박구마(일반인)  | 01.16 22:30

안녕하세요.. cell에 signal을 주고 synchronizaion 시킨 후

시간별로 cell cycle assay를 분석할 예정인데요,..!

cell 고정 시키기 위해 70% 에탄올 처리를 해주어야하잖아요

근데 어디에 희석을 해야할까요,,? 제 생각에는 PBS라고 생각하는데 막 찾아봤는데 Cell cycle protocol에는 이런건 못찾겠더라구요,,

그리고 고정할 때, vortexing하면서 dropwise로 에탄올을 떨어트리라던데..

cell 안죽나욥,,,,,,,,??

1. 70% ethanol을 어디에 희석하는지 궁금합니다.. (distilled water? PBS?)

2. Dropwise 할 때 cell에 최대한 damage를 안주는 방법 있을까요,,?

   (그런데 dna를 염색하는 거라 어차피 셀 죽이는건데 상관이 없을랑가요,,?)

3. Cell 고정 시간은 10분 이상이면 하루나 10분이나 비슷한 결과가 나오나요?

#cell cycle
 
#buffer
 
#cell cycle arrest
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리bio  |  01.16 23:29  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

fixing 과정을 통해 이미 cell은 다 죽어요.

저는 보통 70%를 사다가 쓰는데 DDW에 dilution 해도 됩니다. PBS는 salt  문제로 dilution으로 사용하기에는 적합하지 않습니다. 

vortex와 dropwise로 하는 이유가 cell 들이 single cell로 fixing이 잘 되게 하기 위함이라 damage는 걱정 하지 않으셔도 됩니다. 

저는 보통 4oC에서 30min 합니다. 

 

알호박구마  |  01.17 10:22  

감사합니다!!

 

혹시 고정하고서 tube 벽 부분에 셀이 너무 많이 붙어서 내려오지 않아 cell양이 너무 부족할 거 같습니다..

 

저는 60mm2 plate에 3*10^5 cells로 실험을 진행했는데,,

 

cell cycle analysis에 적합한 세포의 양이 얼마나 될까요?

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