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 전체 > Microbiology > Bacteria
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질문 Helicobacter sydney stain 1 배양관련해서 확인해주실 수 있을까요?
알이가텔(대학원생)  | 01.16 15:05

안녕하세요 대학원생입니다. 다름이 아니라 졸업한 선배의 주제인 헬리코박터를 이어서 하게 되었는데, 인수인계가 잘 되지 않아 궁금한 점이 너무 많습니다...

 

일단 실험실 연구노트를 통해 확인한 바로는 배지는 brucella broth agar + 10% hosre serum을 사용하고 있습니다. 이 조성으로 agar plate를 만들어놓았습니다.

 

helicobacter stock은 40% glycelol + 60 % brucella broth 로 만들고 -70도 딥프리져에 보관 되어 있었습니다.

 

stock을 천천히 녹이고 아가플레이트에 바로 spreading 하였을 때는 잘 자라지 않았고, 일주일 정도 지나니까 colony가 확인 되었습니다. 원래 1주일 정도 걸리는 것인가요..? 혹시 stock을 액체배양을 먼저 하고 그걸 spreading 해주어야 하나요..

혹시 stock이 잘 안만들어져서 다 죽은 것일까요...

 

만약 건강하지 못한 상태에서 stock을 만든것이면 이걸 다시 배양하면 다시 건강한 상태로 될 수 있을까요.. 

 

어떤 조언이라도 감사하니 조언 부탁드립니다..

#helicobacter pylori
 
#헬리코박터
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  01.16 16:57  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

혐기 배양에서 helicobacter는 일반 세균보다 조금 늦게자랍니다.

최적 조적에서 3일 정도면 colony가 보이는데 1주일 후에 colony가 나왔다면

많이 늦게 자란것으로 봐야 할것 같습니다.

만약 균에 damage가 있어 늦게 자랐다면 자란 colony를 다시 접종하면 

정상적으로 배양이 될겁니다.

자란 colony를 새 배지에 streaking해서 혐기 배양해보세요.

알이가텔  |  01.16 17:09  

SPEED님 답변 너무 감사드립니다. 혹시 한가지만 더 여쭈어봐도 될까요?

후에 액체배양을 한다고 하면, Brucella broth 90% + 10% horse serum 을 만들고 single colony를 따서 접종하고, 혐기성 환경에서 키우면 뿌옇게(?) 자랄까요?

대왕개구리SPEED  |  01.16 17:36  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

helicobacter는 위에서 분리하지만 anaerobic은 아니고 microaerophillic이기

때문에 액체 배양시 gentle shaking하면 됩니다.

2~5일 정도 배양하면서 성장 정도를 확인하면 됩니다.

serum은 5~10% 사용하는데 5%, 10% 둘중 어느것이 좋을 지는 한번 test

해보세요.

예전에 실험할 때는 5%를 주로 사용했습니다.

알와디와디  |  01.17 13:22  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
저희 실험실에도 헬리코박터로 졸업하셧는데 자세히는 모르지만 도움이 될까하여 남깁니다...
그 분은 키우실 때 agar에 campy gas pak이용해서 키우셧고, stock도 glycerol만 넣는게아니라 skim milk 섞어서 썼던게 훨씬 잘자랐다고하셨어요...!
대왕개구리강시  |  01.17 20:16  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

헬리코박터는 glycerol 스탁을 하지 않습니다.

한 번 glycerol에 넣으면, 즉시 washing 해줘도 대부분 죽습니다.

그나마 소량이라도 살아남아서 고체배지에서 자라게 되는데 스탁에서 처음 꺼내면 보통 일주일 정도 키워서 콜로니를 봅니다.

나온 콜로니를 새 배지로 옮기면 그때는 잘 자랍니다.

알이가텔  |  01.17 20:20  

와디와디님 조언 감사드립니다. 지금 살아있는 균들부터는 조언해주신데로 skim milk로 stock만드는 방법을 찾아서 해볼게요!

 

강시님 조언 감사드립니다. 혹시 그렇다면 헬리코박터균들을 추후에 다시 사용하기 위한 stock 조성은 어떤 방법이 효과적일까요? 그리고 일주일이 걸리긴했지만 그 친구들을 새로운 배지에 배양하는 것은 single colony를 sticking 하여 새로운 아가 배지에 긁어주면 될까요? 

 

감사합니다!

대왕개구리SPEED  |  01.17 20:56  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

helicobacter도 glycerol stock합니다.

예전에 실험할 때도 BHI + 10% FCS + 15% glycerol로 보관하면서 실험

잘했습니다.

skim milk를 사용해도 무방하지만 사용하지 않는다고 문제될것도 없습니다.

대왕개구리강시  |  01.18 11:11  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

혹시 그렇다면 헬리코박터균들을 추후에 다시 사용하기 위한 stock 조성은 어떤 방법이 효과적일까요? 그리고 일주일이 걸리긴했지만 그 친구들을 새로운 배지에 배양하는 것은 single colony를 sticking 하여 새로운 아가 배지에 긁어주면 될까요? 

 

가장 좋은 방법은 액체질소에 보관하는 것입니다.

제가 운영중인 헬리코박터파이로리 분리균주은행에서는 1,000 주 이상의 균주를 모두 액체질소에 보관합니다. 또한 동결건조도 하지만 동결건조는 발송용으로 사용합니다.

일주일만에 나온 콜로니는 벅벅 긁어서 새로운 아가 배지에 도말해주면 하루 이틀이면 새로운 콜로니를 볼 수 있습니다.

single colony isolation도 대장균의 방법과 같은 방법으로 하시면 됩니다.

알이가텔  |  01.18 14:18  

SPEED 님, 강시 님 사소한 부분까지 답해주셔서 감사드립니다! 좋은 결과 얻도록 하겠습니다!

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