실험 Q&A Cell Biology > Cell Culture
Cell 배양 프로토콜이 서로 상충될 땐 어떻게 해야 하나요?
레벨2 전기영동 (대학원생)
세포를 배양하는 데 있어서 프로토콜이 서로 상충되는 부분이 있어서 조언 구하고자 합니다.
* 새로 사 온 세포를 thawing 할 때는 T25에 한 바이알을 다 풀어서 cell density를 높게 한다.
* 세포가 flask나 plate에 꽉 차지 않은 시점에서 계대한다.
* 세포를 culture 한 뒤 이틀 이내에 다시 바닥에서 떼어내면 세포에 큰 damage가 가므로 이틀 이내에는 다시 계대하지 않는다.
* 세포를 떼어낼 때 물리적인 충격을 주면 세포가 찢어지므로 트립신을 처리한 후에는 최대한 충격을 주지 않는다.
* 트립신을 오래 처리하면 세포에 damage가 가므로 flask를 툭툭 치거나 흔들기, 피펫팅을 통해 재빠르게 떨어뜨린다.
보시면 알겠지만.. 일단 트립신 처리에 대한 부분은 서로 완전히 말이 달라서 어느 쪽이 더 좋을 지 모르겠습니다. 한번은 Hacat cell이 잘 안떨어지니까 cell scraper를 써보지 않겠냐는데, scraper를 계대할 때 사용 해도 되는 지도 모르겠구요.
그리고 처음에 thawing 할 때 부터 너무 cell이 많았더니 다음날 가라앉기만 해도 꽉 차버렸는데, 셀을 하루만에 또 떼면 안된다고 하시는데, overgrowth도 안된다고 하시고... 처음부터 T75 같은데 풀면 안됬었냐고 하니까 만일 cell density가 낮아서 풀자마자 다 죽을 수도 있으니 그것도 안된다고 하시네요.
이렇게 매뉴얼이 서로 상충되는 부분이 있을 땐 어떻게 하는 게 좋나요^^;;
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