실험 Q&A Cell Biology > Transfection
lenti virus infection
레벨1 tjsdk423 (대학원생)
특정 human protein의 CDS 부분을 원하는 vector에 cloning 후 sequence를 확인하고 maxi 까지 진행하였습니다
backbone vector는 MCS_ IRES_zsgreen이 형태의 vector입니다
MCS부위에 target gene을 넣었고,
plasmid DNA의 발현을 확인해보기 위하여 HEK293T cell에 cloning plasmid를 trasfection 하여 FACS를 찍어보았을때 FITC의 발현이 잘 나타났습니다.
이렇게 발현 확인 후, HEK293T cell을 이용하여 lenti virus를 만들어 titration 진행을 위하여 239T cell에 infection 시켰을 시, 발현이 하나도 나타나지 않았습니다
virus packaging의 문제가 아니라고 생각하는 이유는
동시에 다른 insert, 같은 vector를 가진 plasmid로 virus를 만든 것도 같이 진행을 했었는데, 이것은 infection도 되고 stable cell line을 만드는데 성공하였습니다. 어떤 이유에서 infection이 안되고 있는지 잘 모르겠습니다
infection 할 때는 Protamine sulfate를 사용하였습니다.
아시는 분들은 답글달아주세요
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