실험 Q&A Chemical biology > Extraction/Concentration
tyrosinase inhibition activity 실험관련 질문입니다.
레벨1 재재 (대학원생)
안녕하십니까, 이공계 선배님들
대학에서 미생물학을 전공하고있는 석사과정 대학원생입니다.
저는 현재 bacteria를 이용한 tyrosinase inhibition activity 실험을 진행하고있습니다.
이러한 실험진행은 처음인지라 궁금한 것이 많아 글을 쓰게 되었습니다.
제가 현재 진행하고 있는 실험은 이렇습니다.
식약처에 나와있는 실험방법데로
sodium phosphate buffer(pH6.5) 220ul
sample 20ul
tyrosinase(2000unit) 20ul
1.5mM tyrosine 40ul
이 순서데로 96well plate에 분주하여 37도 배양기에 15,45분간 배양한 후
microplate reader 492nm에서 흡광도를 측정하고 있습니다.
(15분 배양하고 측정 후, 다시 37도 배양기에 넣고
30분 더 배양해서 45분 배양 흡광도 측정)
저해율 계산방법은
A : buffer, sample, tyrosinase, tyrosine 다 넣음
B : buffer, sample, tyrosine (tyrosinase는 buffer로 대체)
C : buffer, tyrosinase, tyrosine (대조군), (sample은 buffer로 대체)
D : buffer, tyrosine (sample과 tyrosinase는 buffer로 대체)
저해율 계산 : 100 - [(A-B)/(C-D) X 100]
15분을 배양하고 흡광도를 측정했을 때 대조군(C값)의 흡광도는 3반복 기준 평균 0.321 정도로 도출됩니다.
45분을 배양하고 흡광도를 측정했을 때 대조군(C값)의 흡광도는 3반복 기준
평균 0.510 정도로 도출됩니다.
이렇기 때문에 저해율을 계산하였을 때 15분 배양과 45분 배양의 저해율 값이 다르게 나옵니다.
여기서 !!!
대조군(C값)의 흡광도 값이 몇 정도 될 때
(0.3정도에서 계산하여야하는지? 또는 0.5정도에서 계산하여야하는지)
저해율을 계산하여야 하는지 알려주세요..
아 그리고 tyrosine은 냉장보관, tyrosinase는 버퍼로 녹여서 여러개의 튜브로 소분한 후 냉동보관하였다가 실험시에 녹여서 사용하고 있습니다.
tyrosinase는 냉동보관하였다가 녹여서 사용해도 문제가 되지 않나요?
도와주세요..
Bio마켓 프리미엄