실험 Q&A Cell Biology > Differentiation/Proliferation
T cell activation 시켜보신 분 계신가요
레벨1 9383 (대학생)
안녕하세요
면역세포 쪽은 다뤄본 적도 없다가 갑작스레 맡게 되었는데 여쭤볼 곳도 없고...
실험 결과가 자꾸만 이상하게 나와서 질문 올려봅니다ㅜㅜ
교수님께서 t cell이 분비하는 cytokines의 변화를 보고 싶다고 하셔서 T cell line인 Jurkat을 키우고 있는데요
cytokine을 분비시키기 위해 PMA와 ionomycin을 각각 16nM과 2uM 농도로 배지에 첨가해 주었습니다.
시약을 첨가한 배지는 24시간 후 일반 배지로 갈아주었고 3일 간 배지 교체 없이 culture했는데요, 세포를 회수해 PCR을 해보면 activation 시킨 실험군이 activation 없이 같은 기간동안 일반 배지만을 사용해 키운 control보다 전반적인 cytokine 발현량이 낮습니다ㅜㅜ
몇 번이나 재실험을 했는데도 마찬가지네요. activation 방법에 문제가 있을까요?
그리고 jurkat을 키워보신 적이 있는 분들께 질문 드립니다만
이전에 시약을 첨가한 배지에 72시간 키운 jurkat 세포는 송이를 이루지 않고 단일 세포로 부유했는데요, 24시간 처리 후 일반 배지로 바꿔주었을 땐 증식하여 송이를 이루더군요.
72시간 처리했을 때 단일 세포로 떠다니던 건 activation 되었을 때의 특성일까요? 아니면 단순히 세포가 죽었기 때문일까요.. 그떄는 control의 cytokine 발현이 더 높게 뜨긴 했습니다.
PMA/ionomycin에 독성이 있다고 하여 처리시간을 24시간으로 줄인 것인데 그게 잘못된 판단이었던 건지.....
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