실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
Western blot - Transfer
레벨2 zlahsh (대학생)
Western blot transfer 관련 문의입니다.
Transfer 사진입니다.
1번 사진이 gel running 사진입니다.
2번, 3번 사진이 transfer 이후 membrane에 폰슈 stain 사진입니다.
같이 gel을 runnung 하고 바르게 내려가는 것을 확인하였으며, transfer도 함께 진행 했습니다.
근데 2번 사진 처럼 한 membrane만 transfer가 잘 진행되지 않아 질문 드립니다.
transfer buffer는 10x transfer buffer + 20% methanol + DW로 1x를 만들어 사용했습니다.
membrane은 PVDF를 사용하였고, methanol에 5분간 activation 시켰습니다.
transfer 조건은 350mA, 100 min 진행하였고, cold room에서 ice에 박은 채로 진행했습니다.
위와 같은 조건에서 buffer의 문제인듯해 바꾸어 진행했음에도 같은 결과를 얻었습니다.
transfer 시간을 조금 더 늘려야 할까요???
3번 사진의 marker 역시 조금 일그러지듯 나와서 이유를 잘 모르겠습니다.
조언 주시면 감사합니다. ㅠ_ㅠ
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