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(대학원생)
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20.12.29 18:48
백금선에 문제가 있는지는 어떻게 확인하나요...?
전기영동이 잘 될 때도 있어서 백금선 문제라고는 생각 안해봤긴 합니다..
전기영동이 잘 될 때는 +/- 백금선에서 기포가 올라옵니다.
전기영동이 안될 때 백금선에서 기포가 올라오는지 확인해 보세요.
잘되는 경우도 있다고 한다면, 백금선 문제는 아닙니다.
백금선에 문제가 생기면 아예되지 않습니다.
전압은 어떻게 설정하셨을까요? 그리고, dye도 아예 안내려가나요?
TBE buffer를 새로 썼다고하는게, Stock자체를 새롭게 만드신건가요?
대부분 TBE buffer를 새롭게 만들었다는게, 기존의 stock을 써서 만든 경우더라구요.
생각보다 TBE buffer가 그리 오래가지 않기때문에, 기존 것을 사용한 경우라면 다시 만들어보시는게 좋을듯 합니다.
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레벨1
326
(대학원생)
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20.12.30 09:04
제이하이님! 답변 감사합니다.
전압도 (-) -> (+)로 설정했는데, dye도 아예 안내려갑니다..
dye도 그대로 well 안에 갇혀있는게 보입니다
TAE buffer stock은 저번달에 새로 만들었습니다..!
(50X TAE buffer : Tris-base 242g, glacial acetic acid 57.1ml, 0.5M EDTA(pH 8.0) 100ml, "total volume 1L")
buffer 자체에 문제가 있을 확률이 높은거겠죠...?
Buffer가 문제가 없다고 생각되신다면 아래 항목을 체크해 보세요
1. DNA ladder와 1x loding dye를 걸어 보세요. 파란색 다이가 움직인다면 실험기기상 문제는 없습니다.
2. gDNA가 있기는 한건가요? DNA가 없어 움직이지 않는다고 생각하시는건 아닌가요?
3. 1/2 번 문제가 없다면 running할때 버퍼의 온도가 올라가거나 한쪽 백금선에 버블이 올라오나요? 안올라온다면 백금선 문제입니다.
전기영동 경험이 많지 않은 연구자는 백금선 문제를 얘기하면 끊어진 것으로
생각하는데 접촉 불량이 생기는 경우가 종종 있습니다.
이런경우 전기영동이 잘되가다 갑자기 안되는 경우가 생기다가 또 잘되는
경우가 반복됩니다.
따라서 전기영동이 안될 때 백금선에서 기포가 올라오는지 확인하는면 되고
gel 만들 때도 가능하면 0.5X로 만드는 것이 좋습니다.
간혹 본인은 gel을 정상적으로 만들었다고 하는데 무의식적으로 증류수로
gel을 만드는 경우 전기영동이 안됩니다.
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(대학원생)
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21.01.11 15:04
답변 감사합니다.
gDNA는 나노드랍 측정도 했고 확실히 넣었습니다.
평소에 1X TAE로 젤을 만드는데, 왜 0.5X TAE로 젤을 만들면 더 좋은지 알 수 있을까요..?
그리고 백금선 접촉 불량이면 탱크 수리를 해야하는 거겠죠..??