실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Transformation
E. coli BL21(DE3) pLysS transformation
레벨2 지이두 (대학원생)
안녕하세요
이번에 E. coli BL21(DE3) pLysS 균주로 처음 transformation을 진행하려고 하는데요,
제가 생각하기로는 일단 먼저 제가 원하는 plasmid를 먼저 DH5a균주에서 구성한 다음, 그 plasmid를 E. coli BL21(DE3) pLysS competent cell에 transformation하려고 생각합니다.
보통 DH5a 균주에서는 transformation 확인을 항생제내성과 함께 plasmid를 추출하여 적절한 제한효소로 잘라서 확인하는 방법을 사용하고있는데,
E. coli BL21(DE3) pLysS 에서는 plasmid를 추출하면 2개가 나올 것이라고 예상되는데 이런경우에도 똑같이 제한효소를 처리해서 확인하나요??
그리고 E. coli BL21(DE3) pLysS competent cell을 만들때는 seed culture등과 같은 배양액에 Cm을 넣어준 채로 진행해야하는건가요??
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