안녕하세요, 추운날씨 다들 건강들 하신지요.

다름이 아니라 이번에 BN Gel을 내려야 할 일이 생겨서 몇가지 여쭈어 봅니다.

우선 보고자 하는 단백질을 Membrane Protein은 아니고 Soluabe phosphatase 입니다. 단백질 정제 한 후 Complex로 존재하는지 알아보려 하는 실험입니다.

1. Native Gel 의 경우에 Bromophenol Blue를 이용하여 Bis-Tris Gel로 수행하는 Protocol은 많이 나와있어 정리해 놓았는데 BN Gel의 경우에는 유독 Anode와 Cathode Buffer를 나누어 만드는 흔히 Tricine sds page 에 사용하는 방법으로 많이 나와있어서요, 혹시 특별한 이유가 있는지 여쭈어 봅니다.

2. 앞서 말씀드렸듯이 저의 경우에는 Membrane protein이나 Insoluable한 Protein을 Gel상에서 확인하는 것이 아닌 이미 Soluable 한 단백질들만을 정제해서 이용하는데 Aminocaproic acid 같은 것들을 넣어줄 필요가 있을까요 ?

3. 전기 영동 후에 Band를 다시 얻어 주려고 계획중인데요, Dialysis Bag 에 Band 를 잘게 잘라서 전기장을 걸어주려고 하는데 문제가 될까요 ?

4. 마지막으로 아래와 같이 Buffer 만들어 준비하려고 하는데 조언 부탁드립니다.

Buffer composition

Electrophoresis Buffer (1L)

3.0g Tris

14.4g Glycine

5x Sample Buffer (10ml)

312.5 mM Tris-HCL(pH6.8)

50% Glycerol

1% Comassie blue