실험 Q&A Immunology > Immunoprecipitation
bcl 2와 함께 transfection 한 protein 의 감소 현상
레벨1 Ju-hee (대학원생)
안녕하세요
면역학 전공중인 2년차 대학원생입니다.
immunoprecipitation 실험에서 어려움을 겪고 잇습니다ㅠㅠ bcl 2와 특정 protein의 interaction을 확인하기 위해 immunoprecipitation을 진행하였습니다. lipofectaine 2000 사용하여 transfection (24hr) 한 후, protein overexpression 시켰는데 pre-IP (lysate)에서 bcl 2가 같이 들어간 경우, 다른 protein의 expressino이 급격하게 감소하는 것을 확인하였습니다.
논문 여러개를 참고해서 조건 여러개를 바꿔서 진행해 보기도 했는데요
1) transfection incubation time 24 hr -> 48 hr
2) cell lysis buffer NP40과 RIPA 둘 다 진행
3) bcl 2에는 flag, protein 에는 myc 이 tagging 되어 있어서 immunoprecipitation 을 flag 과 myc 둘 다로 진행
이렇게 했는데도 사진에서 보이는 것과 동일하게 bcl 2 와 함께 들어갔을 경우 protein 의 급격한 감소가 나타났습니다.. bcl 2 가 apoptosis 와 관련된 protein 이라서 같이 들어간 protein 의 감소가 나타나는 건지ㅠ.. bcl 2와 interaction 한다고 잘 알려진 beclin1 도 같이 transfection 시키면 protein이 감소해서 interaction 이 잡히질 않습니다. protein 감소만 잡히면 될것 같은데 어디서 잘못 됐는지 감이 오지 않습니다...ㅠㅠ 도와주세요
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