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질문 동결건조(freezedry)할 때 샘플이 자꾸 녹아요...
알BNMR(대학원생)  | 2020.11.26 10:34
첨부파일 파일첨부: 프리즈드라이 녹음.jpg (350 KB)
이미지 첨부파일

안녕하세요 저는 modify된 DNA를 실험하는 대학원생입니다.

 

저희 연구실의 외국인 포닥분께서 DNA를 직접 합성 및 정제를하고 제가 그 샘플을 받아서 동결건조 후에 실험을 하는데 이때 동결 건조 할때 샘플이 자꾸 녹습니다..

용매는 아세토나이트릴50%, 물 50%의 혼합물이라고 하셨고, 동결건조시 기기 압력은 0.08mBar, 온도는 -50도입니다. 그리고 샘플은 -80도 초저온냉동고에 하루정도 놔두어 충분히 얼린다음 동결건조기에 넣습니다.

아세토나이트릴 녹는점이-45도로 매우 낮아서 그런걸까요..?

아니면 압력이 제대로 안잡혀서 그런걸까요..

그리고 만약 동결건조기 안에서 녹은 상태로 놔두게 되면 샘플도 다 날라갈까요?ㅜ  

#Freezedry
 
#DNA 합성
 
#DNA
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2020.11.26   
압력이 안걸리네요.
알systemic  |  2020.11.26   

1. 샘플이 녹은 이유?

- 압력이 안 걸린 것으로 생각됩니다. (저는 vaccum gauge라는 자연수값으로 진공걸리는 정도를 파악하기에 0.08mBar가 어떤 상태인건지는 잘 모르겠습니다. 보통은 압력이 진공에 가깝게 낮게 조절되어야 동결건조가 잘 진행되는 것으로 알고 있는데, 정확한 것은 압력을 나타내는 부분의 사진을 봐야 판단할 수 있을 것 같습니다.)

- 아세토나이트릴 녹는점이 -45도로 비교적 낮다하더라도 동결건조기 온도가 -50도이기에, -80도에서 얼린 샘플을 곧바로 동결건조기에 넣는다면 그 부분은 문제되지 않을 것입니다

 

2. 샘플의 유실 가능성
- 액체로 녹은 샘플이 튜브 바깥으로 blow up되었다면 당연히 loss가 발생할 것입니다.

- 그렇지 않고 tube내에 액체가 녹은 상태로만 있다면 freeze&thaw가 된 정도일텐데 그것 역시 샘플 내 DNA 농도에는 안 좋은 영향을 줄 수 있습니다. 반복된 freeze&thaw는 DNA, RNA, 단백질 등 대부분의 시료 degradation을 유발합니다.

 

- 녹을 때 blow up 여부, 녹는데 걸리는 시간 등을 동결건조 시작한 이후 어느 정도 관찰하면서 살펴보면 지금의 문제를 해결하는데 도움이 될 것 같습니다.

대왕개구리SPEED  |  2020.11.26   
압력이 조금이라도 걸리면 ACN50%용액이 버블이
생겨 팔콘튜브 벽면이 상당히 지저분하고 시료가
튜브 밖으로 튀어나올겁니가.
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