실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Extraction/Isolation
3T3-L1 분화 중인 상태에서 lysis하는 방법 (MDI 처리 후 2일차에 harvest)
레벨1 펩시콜라 (대학원생)
안녕하세요.
3T3-L1으로 Western blot을 하려고 합니다.
MDI로 분화를 유도하여 2일차에 harvest하여 lysis를 진행했는데 콧물처럼 찐득한 extraction을 얻어 도저히 정량을 피펫으로 따기가 어렵더군요...
PBS로 워싱할 때도 밑부분이 찐득하게 떴어요ㅜㅜ
분화 완료된 상태에서 lysis할 때는 큰 문제 없었습니다.
lysis buffer는 RIPA 1000 ul : protease inhibitor 10 ul : phosphatase inhibitor 10 ul 비율로 6well 기준 200 ul씩 넣었어요.
BCA assay 결과 단백질량이 많아서 lysis buffer를 2배 희석해도 괜찮을 거 같은데 문제는 콧물같은 점성이 단백질까지 깨져서 그런건지... 잘 모르겠습니다ㅠ lysis buffer가 강한건지...
혹시 시간대별로 혹은 MDI 처리 후 2일차에 harvest한 3T3-L1으로 lysis 해보신 분 있으신가요?ㅠㅠ 제발 조언 부탁바랍니다!!
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