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Hexokinase 효소 실험 (unit 계산) |
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 쩜수니(과기인) | 2020.11.24 13:56 |
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안녕하세요.
평소 bric을 통해 공감과 용기를 많이 얻고 있는 연구인입니다.
제가 새로운 실험을 시작하게 되었는데, hexokinase를 이용한 실험입니다.
Unit 계산이 맞는지 여쭙고 싶어 이렇게 글을 남겨봅니다.
제가 가지고 있는 hexokinase는 1 KU, powder(1 U= 1 umol/min)이며 이를 reaction buffer 1 mL에 용해시키려 합니다. 이어 최종 반응 용액(20 uL)에 glucose 20 mM와 용해시킨 hexokinase, reaction buffer, DW를 첨가하여 30분의 반응시간을 통해 10 mM까지 만들어 보려고 합니다.
이때,
1) 1 KU를 reaction buffer 1 mL에 용해시키면 그대로 1 KU/mL이 맞나요?
2) 이론적으로 1)에서 만든 hexokinase를 이용하여 30 분간 반응할 시, 30 umol/30 min이 되어 용액상태의 hexokinase의 처리량은 약 6 uL(총 반응 용액 부피 20 uL)이면 될까요?
너무 두서없이 적어 죄송스럽습니다만, 효소반응에 관련하여 전문가 분들의 답변이 너무나도 간절하여 남겼습니다. 답변 남겨주시면 감사하겠습니다.
감사합니다.
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#enzyme #unit #hexokinase |
답변하기 |
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본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다. |
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 SPEED | 2020.11.24
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1. 1KU/ml이 맞습니다.
2. hexokinase를 이용하여 30 분간 반응할 시
: 효소양 얼마를 반응하나요?
- 30 umol/30 min이 되어
: 1KU/ml 전체를 사용하면 1mmol/min이 됩니다.
전제조건으로 효소양을 정해야 합니다.
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쩜수니 | 2020.11.24
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답변감사합니다 SPEED님!
그렇다면..
20 mM의 glucose를 10 mM까지 hexokinase를 사용하여 낮추겠다고 하면,
10 mM을 줄이는 것이니 1 KU/mL 용액을 10 uL(반응용액 총 부피 20 uL)를 처리하면 맞는 것일지요?
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SPEED | 2020.11.24
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20 mM의 glucose를 10 mM까지 hexokinase를 사용하여 낮추겠다고 하면,
10 mM을 줄이는 것이니 1 KU/mL 용액을 10 uL(반응용액 총 부피 20 uL)를
처리하면 맞는 것일지요?
: 효소 속도론 적으로 생각해보면
1) 1unit = 1umol/min이지만
2) 0.5unit을 2분 처리하면 1umol의 product가 나옵니다.
10unit(10ul)을 1분 처리하면 10umol이 나오고 100분처리하면 10mmol이
나옵니다.
따라서 질문의 10mM을 줄이는 방법은 효소량을 고정하면 100min처리하면
되고 시간을 고정하면 효소량을 변화시키면 됩니다.
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쩜수니 | 2020.11.24
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감사합니다.
제가 가지고 있는 효소 1 KU(1000 u)를 1 mL에 용해시키면 1 KU/mL 용액이 되고, 이 용액 1 ul를 처리하면 1 mmol/min이 되는건가요?
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SPEED | 2020.11.24
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1kunit/ml = 1000unit/ml이므로 1ul = 1unit = 1umol/min입니다.
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쩜수니 | 2020.11.24
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진짜 진짜 감사드립니다.
마지막으로 확인만 한번 더 부탁드리겠습니다.
1 KU의 효소를 100 uL에 용해하면, 1 KU/100 uL가 되고,
이 용액은 10 u/uL가 되니, 만일 30 uL를 처리한다고 하면 300 u/30 uL가 되고, 이는 300 umol/min이고, 이 반응물을 30 분간 반응시킨다면 9000 umol (9 mM)/30 min이 되겠네요.
이 반응이 맞는건지요?
너무 상세하게 답변 주셔서 이해에 큰 도움이 되었습니다!
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SPEED | 2020.11.24
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- 만일 30 uL를 처리한다고 하면 300 u/30 uL가 되고, 이는 300 umol/min이고,
이 반응물을 30 분간 반응시킨다면 9000 umol (9 mM)/30 min이 되겠네요.
: 네, 계산은 맞습니다.
단, 효소 반응속도가 30분 동안 일정하다는 전제하의 조건입니다.
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쩜수니 | 2020.11.24
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네! 저번에 이어 이번에도 큰 가르침 주셔서 감사드립니다!
알려주신 덕분에 용기 많이 얻고 갑니다!
감사합니다.
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