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질문 Hexokinase 효소 실험 (unit 계산)
올챙이쩜수니(과기인)  | 2020.11.24 13:56

안녕하세요.

평소 bric을 통해 공감과 용기를 많이 얻고 있는 연구인입니다.

제가 새로운 실험을 시작하게 되었는데, hexokinase를 이용한 실험입니다.

Unit 계산이 맞는지 여쭙고 싶어 이렇게 글을 남겨봅니다.

제가 가지고 있는 hexokinase는 1 KU, powder(1 U= 1 umol/min)이며 이를 reaction buffer 1 mL에 용해시키려 합니다. 이어 최종 반응 용액(20 uL)에 glucose 20 mM와 용해시킨 hexokinase, reaction buffer, DW를 첨가하여 30분의 반응시간을 통해 10 mM까지 만들어 보려고 합니다.

이때,

1) 1 KU를 reaction buffer 1 mL에 용해시키면 그대로 1 KU/mL이 맞나요?

2) 이론적으로 1)에서 만든 hexokinase를 이용하여 30 분간 반응할 시, 30 umol/30 min이 되어 용액상태의 hexokinase의 처리량은 약 6 uL(총 반응 용액 부피 20 uL)이면 될까요?

 

너무 두서없이 적어 죄송스럽습니다만, 효소반응에 관련하여 전문가 분들의 답변이 너무나도 간절하여 남겼습니다. 답변 남겨주시면 감사하겠습니다.

 

감사합니다.

#enzyme
 
#unit
 
#hexokinase
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2020.11.24   

1. 1KU/ml이 맞습니다.

2. hexokinase를 이용하여 30 분간 반응할 시

: 효소양 얼마를 반응하나요?

- 30 umol/30 min이 되어

: 1KU/ml 전체를 사용하면 1mmol/min이 됩니다.

전제조건으로 효소양을 정해야 합니다.

올챙이쩜수니  |  2020.11.24   

답변감사합니다 SPEED님!

그렇다면..

20 mM의 glucose를 10 mM까지 hexokinase를 사용하여 낮추겠다고 하면,

10 mM을 줄이는 것이니 1 KU/mL 용액을 10 uL(반응용액 총 부피 20 uL)를 처리하면 맞는 것일지요?

대왕개구리SPEED  |  2020.11.24   

20 mM의 glucose를 10 mM까지 hexokinase를 사용하여 낮추겠다고 하면,

10 mM을 줄이는 것이니 1 KU/mL 용액을 10 uL(반응용액 총 부피 20 uL)를

처리하면 맞는 것일지요?

: 효소 속도론 적으로 생각해보면

1) 1unit = 1umol/min이지만

2) 0.5unit을 2분 처리하면 1umol의 product가 나옵니다.

10unit(10ul)을 1분 처리하면 10umol이 나오고 100분처리하면 10mmol이

나옵니다.

따라서 질문의 10mM을 줄이는 방법은 효소량을 고정하면 100min처리하면 

되고 시간을 고정하면 효소량을 변화시키면 됩니다.

 

올챙이쩜수니  |  2020.11.24   

감사합니다.

제가 가지고 있는 효소 1 KU(1000 u)를 1 mL에 용해시키면 1 KU/mL 용액이 되고, 이 용액 1 ul를 처리하면 1 mmol/min이 되는건가요?

대왕개구리SPEED  |  2020.11.24   

1kunit/ml = 1000unit/ml이므로 1ul = 1unit = 1umol/min입니다.

올챙이쩜수니  |  2020.11.24   

진짜 진짜 감사드립니다.

마지막으로 확인만 한번 더 부탁드리겠습니다.

1 KU의 효소를 100 uL에 용해하면, 1 KU/100 uL가 되고,

이 용액은 10 u/uL가 되니, 만일 30 uL를 처리한다고 하면 300 u/30 uL가 되고, 이는 300 umol/min이고, 이 반응물을 30 분간 반응시킨다면 9000 umol (9 mM)/30 min이 되겠네요.

이 반응이 맞는건지요?

너무 상세하게 답변 주셔서 이해에 큰 도움이 되었습니다!

대왕개구리SPEED  |  2020.11.24   

- 만일 30 uL를 처리한다고 하면 300 u/30 uL가 되고, 이는 300 umol/min이고,

이 반응물을 30 분간 반응시킨다면 9000 umol (9 mM)/30 min이 되겠네요.

: 네,  계산은 맞습니다.

단,  효소 반응속도가 30분 동안 일정하다는 전제하의 조건입니다.

 

올챙이쩜수니  |  2020.11.24   

네! 저번에 이어 이번에도 큰 가르침 주셔서 감사드립니다!

알려주신 덕분에 용기 많이 얻고 갑니다!

감사합니다.

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