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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 항체 재사용후 잡밴드 많아지는 현상
알slide(대학원생)  | 2020.11.23 18:48

웨스턴 블랏 실험 중 말그대로 잡밴드가 많아져서 질문드립니다.

항체구입 후 첫 사용시 이렇게 밴드가 희미하게라도 보였는데

upload_image

항체를 새로 만들어 사용했더니 이런 식으로 잡밴드가 너무 많아졌습니다.

upload_image

둘다 blocking은 5%bsa,1h,RT에서 진행하였고 1st antibody도 1:200,2nd antibody도 1:5000으로 조건은 동일하였는데 잡밴드가 많아진 것은 왜그런걸까요..?

로딩양도 둘다 20ug,12%gel이고 달라진건 15comb과 10comb 차이밖에 없습니다..

#western blot
 
#antibody
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2020.11.23   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

target이 어느것인지 모르겠지만 우선 동일양의 band의 경우 10well 보다 15well이

진하게 보입니다.

위의 사진은 너무 안나온것 같고 밑의 사진이 정상적인것 같은 느낌입니다.

poly-Ab인가요?

washing을 잘 해도 Ab문제 아닌가 합니다.

항체 재사용이 아니라 두 사진 모두 fresh 항체를 사용한 경우네요.

알slide  |  2020.11.24   

target band는 38kD이고 두 멤브레인 다 PM2610 마커를 사용하였습니다.

따라서 윗 멤브레인에서 35kD과 45kD 사이 오른쪽으로 갈수록 점점 진하게 보이는 밴드가 제가 찾던 밴드가 아닐까..?라고 추측중에 있습니다.

Antibody는 Cayman #120550을 사용하였고 poly antibody입니다.

membrane은 PVDF로 MEOH로 2분간 activation 후 바로 transfer하였기 때문에 membrane 문제는 아닌것같은데...항체를 바꾸는 것이 맞을까요..?

대왕개구리SPEED  |  2020.11.24   

Ab를 RT에서 붙여 보고 washing도 좀더 wild하게 해서도 비슷하게 나오면

Ab를 바꾸는 것이 좋을 듯 합니다.

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