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질문 sample buffer 로 바로 lysis 할 때 주의할 점이 있을까요?
개구리힘들다힘들어(대학원생)  | 2020.11.18 12:57

안녕하세요?

phosphoform 을 detect 하기 위해 이리저리 알아보던 중 별도의 lysis buffer 없이 바로 sample buffer 로 lysis 해서 cooking 후 run 할 때 이쁜 밴드가 잘 나오는 데이터들을 확인했습니다.

저도 오늘 같은 방법으로 실험을 진행했는데, 워싱 후 펠렛을 살짝 풀어준 후 샘플버퍼를 넣었더니 생각보다 굉장히 처음엔 viscosity 가 높더라구요. 아마도 genomic DNA 때문이겠죠? 그래도 당황하지않고 vortexing을 강하게 여러번 해주고 쿠킹(95도, 5분) 하니 그래도  점도가 살짝 있더라구요..지금 러닝중인데 약간 처음에는 끌리는 느낌이 나더니 지금은 그래도 잘 내려가고는 있습니다.

이렇게 해서 밴드가 잘 나오면 상관이 없겠지만, 약간 끌리는 느낌이 나던게 불안해서 결과 확인 전 선배님들의 조언을 듣기 위해 적어봅니다ㅎㅎ 

혹시 해당 방법으로 cell lysis를 진행할 때 주의할 점이나, 개선해야할 방법이 있을까요? 조언해주시면 달게 받겠습니다.

감사합니다.

 

#lysis
 
#cell
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리BlackSmile  |  2020.11.18   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

올려주신 method의 경우 저도 가끔 사용하는 방법입니다.

(저는 보통 cell양이 적을 때 사용합니다. 96 well scale 실험에서 cell seeding을 한후에 western 할 때는 96-well에 바로 sample buffer 넣고 pipetting을 통해 lysis하고 cooking해서 western blot을...)

 

Cooking을 한 후에 바로 gel에 loading을 하시나요? 점도가 있는 것에 대해 걱정이라면 Cooking을 한 다음에 centrifuge를 강하게 돌린 다음에 상층액을 loading해서 실험을 진행할 수도 있습니다.

개구리힘들다힘들어  |  2020.11.18   

조언 감사합니다 선배님ㅎㅎ 센트리 돌리긴 했는데 좀 더 돌려볼까싶기도 하네요ㅎㅎ  

혹시 이런식으로 하시는 다른 분들도 제가 적은거 보시고 문제점은 없는지 확인 부탁드립니다ㅎㅎ 

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