실험 Q&A Chemical biology > Analysis
cell extract 희석 및 buffer 제조
레벨5 녕 (대학원생)
안녕하세요.
cell 실험을 해본적이 없는데다가 연구실에 저 혼자뿐이라 여쭤볼 분이 없어서 질문하게 되었습니다..
완전 기초인데 답변해주시면 감사하겠습니다!
1. protein assay를 할건데, standard 희석액은 protein solution + NaCl 을 이용하여 제조했습니다. sample은 cell extract를 8배 희석한 것을 사용해야합니다. 그렇다면 cell extract도 NaCl로 희석하는 것이 맞나요?
2. stock 시킨 cell extract 농도는 5x10^5이면 8배 희석 시,
5x10^5 / X + 5x10^5 = 1/8 로 하여 계산하면 될까요?
3. Reaction buffer 제조 시에 20mM tris + 0.5mM EDTA + 0.035% SDS 를 만들고 여기에 proteasome substrate 100uM을 넣는 것이 프로토콜입니다. 어떻게 만들어야 하는지 모르겠습니다.. (proteasome substrate는 reaction buffer 양에 따라 넣는 양이 다를 것 같은데 자세하게 쓰여있지 않습니다.)
4. 프로토콜에서 cell protein 10uM + control 50uM + Reaction buffer 150uM 넣어야 하고 control은 DMSO 1% 농도가 되도록 첨가한다고 쓰여있는데, 50uM가 DMSO 1%를 의미하는 걸까요?
3,4번은 연구실에 계셨던 졸업하신 선배님께 직접 여쭤보는 것이 좋을지 고민입니다..
도와주시면 감사하겠습니다! ㅜㅡㅜ
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