실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > etc.
전국에 계신 선배님들 Amylase unit 계산법이 헷갈려서 질문드립니다ㅠㅠ
레벨2 알려주세요. (대학생)
amylase unit 계산이 잘 안되어 글 남기게 되었습니다 ㅠ
답변하시기 편하시게 번호 매겨서 질문드리겠습니다.
1. glucose standard curve 작성 시 x축이 mg/mL이며, 농도별로
glucose를 만들어 300uL와 DNS 900uL를 반응했습니다.
그러나 실제 반응에서는 총 volume이 300uL이긴 하나 효소 150uL와 기질 150uL를 반응했습니다.
→ 표준곡선 방정식에 대입하면 얼마의 mg/mL 나올껀데, 표준곡선과
실제반응의 volume이 같다고 봐야하나요 아니면 효소 150uL 기준으로 해서
표준곡선 volume이 300uL이니 2를 곱해줘서 방정식 값을 취해야 하나요?
2. 방정식에 대입하여 나온 값이 예를 들어 0.180156mg/mL라면,
1unit = 1분간 1umol의 glucose 양이니
(계산해보니 1umol = 0.180156mg 였습니다.)
1umol/mL이며, 반응시간은 10분이였으니 10를 나누게되면 이 효소는 0.1U/mL이 맞나요? 아니면 기질과 효소 부피 합은 나눠줘야 하나요?
3. 2번에서 나온 값처럼 0.1U/mL이라면, 실제 효소액은 150uL이므로
1mL와 150uL은 6.666...차이 이므로, 이 효소액은 0.015U 의 값을 가지는게 맞나요?
질문이 누추하지만, 답변 부탁드립니다 ㅠ
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