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질문 마우스 spleen에서 Treg 세포 분석
알sskr1207(대학원생)  | 2020.11.13 13:54

실험실에서 처음 면역세포 분석을 하게 되서 질문을 남깁니다.

가장 많이 연구된 비장을 가지고 먼저 테스트 해보려고하는데

먼저 저희는 CD4, CD8, CD19와 같은 기본적은 surface 마커들은 분석이 되는데

Foxp3, IL-17와 같이 intracellualr 마커들에 분석이 여러서 질문합니다.

 

많은 논문들을 참고해서 아래와같이 분석을 진행했습니다.

WT 마우스 비장을 single cell로 분리해서 RBC lysis시킨 후

cell stimulation cocktali(PMA, inomycin, brefelin A)을 넣고 4시간 배양시킨 후

intracellualr staining 키트 방법 그대로 염색을 해서

FACS 분석을 했는데 전혀 발현이 되지 않습니다.

 

실험방법에 문제가 있는건가 싶어서 TNF-a도 함께 진행했는데

TNF-a는 발현이 제대로 나왔습니다.

 

제 방법에 문제가 있는건지

아니면 Treg, Th17 세포를 보려면 꼭 분화를 시켜서 봐야하는지 궁금해서

질문남깁니다.

 

너무 기초적인 질문이라 부끄럽지만 고수분들께 도움을 받고 싶습니다~~

 

#면역세포
 
#Treg
 
#Th17
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
gguljjam  |  2021.01.26    

저도 최근 파일럿 실험을 위해 마우스 spleen에서 Treg를 보고 있습니다. 저는 아무런 분화 없이 FACS analysis한 결과 Treg이 있다는 것을 확인했습니다. 따로 정해진 protocol이 없다면 분화 단계만 생략하여 실험을 진행해보는 것도 좋다고 생각합니다. 

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