실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
전기 영동 실험이 실패 했는데 원인을 모르겠습니다.
레벨1 똑똑하구만 (대학생)
고수님들 안녕하세요...
직책이 대학생이라고는 되어 있는데, 사실 고등학생입니다.
고등학교 생명과학실험 과목에서 전기 영동 실험을 했는데요..
왜 실패 했는지 궁금해서 이렇게 고수님들께 여쭈어봅니다.
첨부된 사진은 전기 영동을 한 결과 입니다.
well이 총 10개 였는데요... 맨 오른쪽부터 왼쪽 순서로 넣은 용액은 다음과같습니다.
1 : DNA Standard Marker 5ul
2: PCR mixture 0 cycle 23ul
3: 10cycle 후의 PCR mixture 23ul
4 : PCR 20 cycle 23ul
5: PCR 30 cycle 23ul
6: 1번 Plasmid 5ul + loading dye 1ul
7: 2번 Plasmid 5ul + loading dye 1ul
8: 3번 Plasmid 5ul + loading dye 1ul
9: 4번 Plasmid 5ul + loading dye 1ul
10: 5번 Plasmid 5ul + loading dye 1ul
사진에 보이는 것처럼 UV illuminator로 비췄을 때 형광으로 나오는 것은 7,8,9,10번 밖에 없습니다. 각각의 Plasmid는 모
두 같은 종류이고 저희가 수행평가로 진행을 해서 실험자 를 구분하기 위해 넘버링을 했으므로 신경 안쓰셔도 됩니다.문제는 dna standard marker랑 PCR mixture 입니다. PCR mixture는 처음에 제작할 때 또는 PCR 과정 중에 문제가 있었다고 할 수도 있지만....
dna standard marker는 도저히 왜 전기영
동이 안 됬는지 이해가 가지 않습니다. 다른 모둠은 옅 게라 도 형광이 나 왔더라구요....(나온 곳도 있고 아닌 곳도 있습니다.)Plasmid는 파라필름 위해서 피펫팅을 통해
loading dye와 섞어서 염색 처리를 따로 해주었고, marker와 PCR mixture는 따로 염색 처리를 추가적으로 안해도 된다고 해서 바로 gel에 loading 했습니다. 전기영동은 약 30분간 진행했습니다.혹시 이런 경험이 많으셔서 원인이
추측되시는 고수님들 꼭 답변 부탁드립니다. 조금이라도 이상한 부분이 있다면 지적해주시면 감사하겠습니다.감사합니다.
ps) 선생님께서 사실은 UV illuminator로 본 이후에 더 좋은 기계(?)로 촬영할 수 있도록 보여줄려고 하셨는데 중간에 지시 전달이 실수가 나서 저희가 겔을 다 버렸어요... 그래서 UV illuminator로만 사진 촬영을 했습니다. 인터넷에 보니 그 기계로 촬영을 다들 해놓았더라구요... 하지만 다른조는 UV illuminator만으로도 10개의 well이 모두 형광으로 보였던 조가 있었던 것은 확실합니다.
+키트는 EDVOTEK 사의 키트더라구요..
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