실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > mRNA Analysis
Transfected cell에서의 qRT-PCR control 질문
레벨1 아카시아꿀 (대학원생)
안녕하세요. qRT-PCR에 대한 질문있습니다. 동물세포에 pcDNA3.1로 트렌스펙션하였습니다. Transfected cell에서 qRT PCR시 control로 2개를 잡는게 맞는것인가요? 한 컨트롤로는 gapdh같은 하우스키핑 유전자로 endogenous한 level에서 normalization을 하고자하고 두번째로는 벡터에 포함된 selection drug(neomycin)유전자를 컨트롤로 잡아서 transfection efficiency를 보려고 합니다. 발현하고자하는 타겟유전자에 UTR을 넣어준것의유무에 따라 mRNa stability가 다른지 테스트하는게 목적인데, utr들어간 것과 안들어간 실험군의 transfection efficiency를 보려고합니다. 그런데 타겟유전자로 바로 qRT-PCR을 하는것이 알맞지않아보였습니다. 문헌에서도 많진않지만 벡터에 포함된 selection drug을 컨트롤로 잡는것을 보았습니다. 질문은 1.이렇게 하는것이 맞는 방법인지 문제없는지와 2. 컨트롤을 두개로 normalization을 할때 먼저 gapdh로 endogenous mRNa level을 맞춰준 후 selection drug gene mRNA을 normalization기준으로 잡고 타겟유전자 mRNA level을 비교해도 괜찮을까요?
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