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질문 Serum, CSF에서 LPS (Lipopolysaccharide)의 측정이 되지 않습니다.
올챙이7782256(과기인)  | 10.30 17:10

현재 감염관련 실험으로 Serum, CSF 샘플 내 LPS의 양을 LAL assay로 측정하고 있습니다. 

이전에 LPS가 검출되었던 Serum과 CSF 샘플로 최근 재현실험한 결과, 

이전 결과와 다르게 샘플에서 LPS가 전혀 검출 되지 않아 질문을 드립니다.

 

6개월전, Serum과 CSF 샘플 내 LPS를 LAL assay로 측정하여 LPS를 확인하였습니다. 실험이 끝난 위 샘플들을 -80도에 얼려서 보관하였고, 6개월 후인 최근 다시 해동하여 같은 방법인 LAL assay로 LPS 정량을 하였는데 이번에는 LPS가 검출되지 않았습니다.

샘플과 함께 LAL assay 진행했던 LPS Standard에서는 발색이 잘 나타나는 것을 보아 분석키트의 문제는 아니라고 생각됩니다. 

트러블슈팅을 위해서 관련 참고문헌을 조사하였습니다. Serum 같은 생체유래물에 있는 단백질이 LAL assay kit에 방해가 될 수 있다는 문헌을 확인하였고, 그 해결방안으로 열처리가 도움이 될 수 있다는 내용을 보았습니다. 이를 바탕으로 Serum, CSF 샘플들을 10분동안 고온처리 (100도)하여 LAL assay 하여도 LPS가 확인되지 않았습니다.

혹시 이 재현성 문제를 해결하기 위해서 제가 추가로 검토해야할 사항이나 조언이 있으시면 답변 부탁드리겠습니다. 전문가 여러분들의 조언을 기다리겠습니다.

감사합니다.

 

PS.

Serum, CSF 샘플은 자체적으로 색을 띄기때문에 PBS에 희석하여 분석하였습니다. (6개월 전에는 1/10 희석하여도 LPS가 검출되었지만, 같은 샘플이 현재는 원액에서도 LPS가 검출되지 않습니다.)

LAL assay kit는 Genscript의 ToxinSensorTM Chromogenic LAL Endotoxin Assay Kit (Cat. No. L00350)을 사용하였습니다.

위의 LAL assay kit 외에도 Charles river의 Endosafe nexgen-PTS로도 확인하였지만 LPS가 검출되지 않았습니다.


 

#LPS
 
#Serum
 
#LAL assay
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  10.30 17:21  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

LAL test 시 spike, recovery test도 진행했나요?

serum, CSF에 LPS 양이 많지 않을 것 같은데 serum albumin 같은 것이 방해를

합니다.

초기 분석 시 LPS가 검출되었다고 하니까 albumin이 방해를 해도 검출 한도에

들어와서 검출이 된것 같지만 recovery test를 하지 않았으면 정확한 양을

알수는 없습니다.

또한 LPS를 냉동 후 해동하면 LAL test에서 감도가 내려갑니다.

LPS ELISA assay가 좋을 수도 있습니다.

7782256  |  10.30 18:17   

ㄴ SPEED님, 답변과 조언 감사드립니다.

제가 Serum, CSF 샘플을 처음부터 냉동된 상태로 수령하여 실험하고 있었습니다. Spikem recovery test를 초반에 진행하지는 않았지만, 조언주신 것처럼 다음부터는 샘플을 얼렸다 녹였다 하는 과정을 최대한 줄이도록 하겠습니다.

현재 제가 사용하는 LAL assay kit는 최소 0.01 EU/ml까지 검출이 가능한 kit입니다. 이보다 더 감도가 좋은 LPS ELISA kit가 있는지 확인하여 시도해보도록 하겠습니다!

감사합니다.

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