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질문 in fusion 에 대해서
올챙이단백질결정(대학원생)  | 10.28 18:18

takara infusion kit를 사용하고 있는데 이론적으로 궁금한 부분이 있어서 연락드립니다. !! 

insert와 vector를 15bp overlap 되게 디자인해서 infusion하고 있습니다. 

이론적으로는 제한효소를 사용해서 같은 부분을 절단하고 ligase를 사용하는게  일반적인데 제한효소와 ligase없이  infusionkit는 어떻게 특정부분,  절단해서 infusion 될 수 있나요??

#infusion
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
세포독성  |  10.30 12:30   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

예전에 잠깐 In-fusion 킷을 사용한 기억이 있어서 남깁니다.

 

일단 vector 절단시에는 일반적인 cloning처럼 restriction enzyme 처리합니다.

 

대신 In-fusion 킷의 경우에는 insert 처리방식이

일반적인 cloning - vector와 같은 restriction enzyme로 절단

이 아니라 insert와 vector에 일부가 겹치는 primer를 디자인하고, PCR을 돌리면 target insert 양 끝에 vector랑 결합이 가능한 base pair가 생기죠

 

이렇게 처리해논 vector랑 insert를 In-fusion 킷에있는 enzyme으로 처리해서 cloning을 완성시킵니다

 

즉, ristriction enzyme 사용 - vector 절단 시

    ligase - In-fusion premix에 포함

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