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질문 요새 cell이 자꾸 죽습니다... 오염인걸까요?
올챙이zzi(대학원생)  | 10.28 14:57

안녕하세요

요새 자꾸 셀들이 죽어가는데 이유를 모르겠습니다

 

혼자서 6개정도 셀을 다루고 있는데 모두 같은 배지를 사용합니다

(전부 암세포입니다)

배지를 많이 써서 새 배지를 매주 만들어 사용하고 있습니다

연구실 청소도 자주하고 몇년동안 같은 방식으로 셀을 다루고 있습니다

셀 스탁도 전부 상태 좋을때 했고, 대부분 19~20년도에 만들었습니다

 

셀 상태가 처음엔 좋았다가 어느순간 갑자기 오염이 되거나 세포 스스로 죽어서..? 세포 찌꺼기들이 둥둥 떠다니고 

찌꺼기들이 점차 많아져 결국 셀이 죽게되는 현상들이 반복되고 있습니다

부착/부유 세포 가리지 않고 어느순간 상태가 안 좋아지다가 관리를 정성들여하면 다시 상태가 괜찮아지기도 하지만 대부분 죽습니다

정확한 이유를 모르겠고 스탁도 점점 줄어들고있어서 마음이 안좋습니다.. 

이런경우가 여태 없었는데 요 몇주동안 반복되고 있습니다....

upload_image

사진으로 보시면 까맣게 뭉쳐있는것과 주변에 세포 찌꺼기?로 추정되는게 많이 있어요

뻗어나가는 세포 모양이 점점 얇고 가닥가닥 모양으로 바꼈어요

겨우 연명하고 있는듯한 느낌입니다...

upload_image

이건 좀 더 확대한 사진이구요..

멀쩡하다가 어느순간부터 모양도 바뀌고 찌꺼기?같은 것들이 생겼어요

세포가 증식할수록 찌꺼기들은 점점 더 많아지구요ㅠㅠ (세포 증식도 더딥니다)

세포가 적어서 그런가싶어 60파이 디쉬에도 키워봤지만 똑같습니다ㅠ

upload_image

이건 다른 셀인데 세포 주변에 뭐가 생깁니다..

이건 오염인걸까요? 시간이 지날수록 많이 생기고 나중엔 배지도 혼탁해지는게.. 오염이 맞는것 같아요

오염이면 도대체 원인이 뭔지 모르겠습니다

그냥 단순히 셀 수명이 다한걸까요?  

 

 

 

 

#Cell contamination
 
#cancer cell
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  10.28 15:01  

- 어느순간 갑자기 오염이 되거나 세포 스스로 죽어서..

: 배양을 어느정도 길게 하나요?

올챙이zzi  |  10.28 15:23  

speed님 주로 3~4일에 한번 계대합니다.. 

셀마다 다르지만 보통 일주일에 두번 계대합니다..

월/목 또는 화/금 이런식으로요

중간에 셀이 어느정도차면 추가로 계대하기도합니다.. 

혹시 계대주기가 길어서 문제가 된 것일까요?

(배양주기도 몇년동안 동일합니다ㅠ)

 

셀수를 많게 배양하면 저 찌꺼기같은게 많이 생겨서 결국 죽게되고

또 그걸 피하기위해 적게 깔면 성장 속도가 더뎌져서 결국 사진처럼 되고 죽습니다..

플레이트에 씨딩하는 셀양도 몇년동안 동일합니다.. 

동결방식도 계대방식도 몇년동안 동일한데 요 몇주 이런 현상이 생겨서 어느부분이 문제인지 모르겠습니다ㅠ

대왕개구리SPEED  |  10.28 15:28  

6개 cell의 passage number가 어느정도인가요?

그리고 cell을 꺼내고 나서 계속 배양을 하나요? 아니면 2~3회 seed culture 후

본 실험 하고나서 cell을 폐기하나요?

올챙이zzi  |  10.28 15:37  

여기저기서 받아온 셀들이라 passage number가 정확하지 않습니다

처음 구입해서 분양 받았을때 30~50번대에서 시작해서 60~80번대가 된것도 있고

타 대학교에서 받아온 셀들은 passage number가 적혀있지 않습니다..

 

맨 처음 해동하고 상태 좋을때 스탁을 여러개 만들어두고, 셀을 키우면서 중간중간 스탁을 더 만들곤합니다.

그리고 스탁 하나씩 풀어서 실험을하고 상태가 안 좋아지면 폐기하고 다시 스탁을 풀어 실험하는식으로 진행하고있습니다.. 

 

대왕개구리SPEED  |  10.28 15:55  

1. passage number가 너무 많은 느낌이 듭니다.

2. 실험이 있을 때문 cell을 꺼내 최소한의 seed culture 후 본 실험을 하는것이

어떤 cell이든 좋습니다.

본 실험 후 계속 배양하지 말고 폐기해야합니다.

cell 실험은 실험 없을 때 계속 seed culture하는 것은 안좋습니다.

암세포는 원래 잘자라는 cell이기 때문에 현재 cell에 문제가 있을 듯 합니다.

올챙이zzi  |  10.28 16:53  

답변 감사합니다

역시 그냥 셀 자체에 문제가 있었나봅니다

그런데 한가지 궁금한것이.. 세포 상태가 안 좋아서 폐기하고 같은 셀(passage 가 다른)을 해동하여 키우면 같은 현상이 반복되는데.. 

이런 문제도 본래 셀 자체의 상태가 안좋았어서 그런거겠죠?

대왕개구리SPEED  |  10.28 16:58  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

cell 상태가안좋아서 그럴수도 있고 보관 방법이 안좋아서 처음에는 이상이

없다가 시간이 지남에 따라 cell 상태가 보관중에 안좋아 지는 경우도

있습니다.

올챙이zzi  |  10.28 17:18  

네 셀 스탁 방법이랑 다시 한번 검토해보겠습니다

정말 감사합니다! 

0789zxc  |  10.30 11:05   

모든 cell들이 다 그렇다면 incubator에 contamination이 제일 의심되지 않을까요? 저도 궁금해서 그런데 incubator는 얼마나 자주 청소하시나요?!

지나가는 이  |  10.30 16:15   

원인을 모를 경우 다른 실험실을 control로 잡고 해보세요.

 

같은 cell을 나눠서 키우는데, 다른 실험실은 잘 자란다 하면, cell 이 문제가 아니라 다른 게 문제일 수 있으니까요.

 

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