실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
transfection 후 western blotting하는데 해당 단백이 아닌 다른 단백도 같이 나와요
레벨1 문제가많아요 (대학원생)
RAW24.7cell에 DNA를 lipofection 방법으로 transfection합니다.
사용하는 reagent는 Fugene6이구요
Hsp90-flag gene과 IKKr-myc gene을 cotransfection하는데 샘플 중 Hsp90만 들어간 샘플과 IKKr만 들어간 샘플, 둘 다 들어간 샘플 등등이 있습니다.
각각의 샘플을 western blotting으로 확인하는데요 Hsp90 antibody를 붙였을 때 Hsp90뿐 아니라 모든 샘플에서 band가 detech 됩니다. ㅠㅠ
Ikkr antibody 역시 IKKr transfectioned lysate가 아닌 모든 lysate에서 band가 detech되구요..
원래는 detech되면 안되는 부분 아닌가요..? detech 될 수도 있나요?
해당 gene transfection이 이루어지지 않았는데도 wb시 detech될 수 있는건가요?
일단은 tag gene antibody로 다시 해보려합니다. ㅠㅠ
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