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1. DNA를 2개의 restriction enzyme으로 cut했을때 왜 이런 모습(bp는 같은데 흐릿해짐)이 나타나는지 궁금합니다(line1→line3)
양 끝이 잘리는거라면 잘린 부분도 나타나야하는거 아닌가요?/
=> 잘린 DNA 조각의 크기가 크다면 agarose gel에서 보입니다.
하지만 insert (아마도 PCR로 준비한 듯) DNA의 양 말단에 있는 제한효쇼 자리를 자르면 몇 bp 안되는 아주 작은 DNA가 떨어져 나올것이므로 agarose gel에서 안보이는게 정상입
니다.
2. line5가 line3,line4의 결합을 의미하는건가요?
=> line5는 transformant에서 miniprep한 plasmid인가요?
그렇다면 vector와 insert가 붙어있는 것이죠.
lane6은 transfromant에서 뽑은 plasmid를 클로닝에 사용했던 제한효소로 잘랐으므로 사용한 vector와 insert 와 정확하게 크기가 같은 DNA가 얻어진 것입니다.
BamHI sute는 insert DNA에 vector의 BamHI site 근처 260-270bp 정도 떨어진 곳에 하나가 있네요.
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레벨1
mango5420
(대학생)
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20.10.25 15:41
답변 감사드립니다~!
한가지만 더 질문드리겠습니다. 이 자료를 참고로, line7에서 Vector-insertDNA를 Sal1과 BamH1으로 cut 했을 때
잘린 부분이 왜 line6보다 아래에 있나요? 더 큰 조각으로 잘려서 밴드가 좀 위쪽으로 나타나야하지않나요?
SalI-PstI으로 잘랐을때 나오는 밴드보다 SalI-BamHI으로 자랐더니 잘려져 나온 밴드가 더 작게 나왔죠.
SalI-BamHI 밴드 아래에 보면 250bp 보다 아주 조금 큰 밴드가 하나 더 있습니다.
그 박은 밴드는 아마도 inser의 PstI 근처에 대략 250bp 정도 떨어진 위치에 BamHI site가 하나 더 있어서 잘린 것일 겁니다.
그래서 원래 준비했던 insert 보다 250bp 정도 작은 750bp 밴드가 나온겁니다.