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BMDM에서 LPS stimulation 관련 질문입니다
레벨1 ㅡ,ㅡ;; (대학원생)
안녕하세요 BMDM에서 LPS stimulation에서 특정 material을 LPS와 cotreat 한 경우 cytokine양의 감소관련 실험을 진행하고 있습니다.
여기에서 물어보고 싶은 것이 있습니다.
기본적으로 BMDM을 키울때에는 mouse에서 BMC를 마리당 100mm dish에 complete media(10%FBS+alpha-MEM+1%Abx) 4h~O.N. incubation해서 macrophage progenitor이외의 부착성 cell들을 붙이고 그중에 sup에 떠있는 cell들을 걷어서 위의 complete media에 M-CSF를 treat한 후 3d culture 합니다. 그렇게 자란 BMDM을 lifter로 긁어내어 1x10^6cells/ml로 complete media에 resuspension한 후 24well plate에 well당 500ml씩 분주하고 O.N. incubation 하여 cell을 seeding 합니다.
Macrophage가 붙은 것을 확인한 후 serum free media로 washing해준 후 위의 complete media를 넣고 LPS그리고 material을 넣고 진행을 합니다.
그런데 보통 LPS stimulation을 줄 때 FBS를 넣으면 안되거나 5%정도로 비교적 소량을 넣어야 하나요? 그렇다면 그 이유는 무엇인가요??
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