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 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
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질문 His tag으로 정제된 protein을 다른 방법으로 정제할수 있을까요??
알동동동__(대학원생)  | 2020.10.20 16:00
안녕하세요 단백질 발현을 처음 해보는 학생입니다.

His tag으로 정제를 완료한 protein을 sds page로 확인을 했는데 E.coli 내부에 있는 his rich protein이 더 많이 발현이 되어 문제가 생겼습니다. 이 protein만 따로 살릴수 있는 방법이 없을까요??
#단백질
 
#정제
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2020.10.20   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- His tag으로 정제를 완료한 protein을 sds page로 확인을 했는데 E.coli 내부에

있는 his rich protein이 더 많이 발현이 되어 문제가 생겼습니다

: 결과적으로 정제를 완료한게 아니라 정제가 안된거네요.

affinity 다음에는 band pattern에 따라서 IEX 컬럼정제가 좋을 수도 있고

GF 컬럼정제가 좋을 수도 있습니다.

시료 부피와 농도 그리고 목적 단백질과 제거해야 할 단백질 분자량이 어떻게

되나요?

알동동동__  |  2020.10.20   
전체 시료의 농도는 0.4mg/ml 정도 되고 목적 단백질은 11kDa, 제거해야할 단백질은 23kDa 정도 됩니다
대왕개구리SPEED  |  2020.10.20   

prep. LC 장비가 있으면 GF 컬럼정제가 편할것 같지만 장비가 없으면

batch 정제 방식의 IEX 정제가 편할것 같습니다.

알동동동__  |  2020.10.20   
감사합니다ㅠㅠ
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