실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
Restriction digestion buffer의 final volume 결정
레벨2 PDpotter (대학생)
안녕하세요, gene cloning에 대해 배우고 있는 대학생입니다.
restriction digestion 부분을 지금 공부하고 있는데, 교재의 내용에 이해가 되지 않는 부분이 있어 질문을 올립니다.
교재에서는 2㎍ of 16㎕ DNA sample을 digestion하는 과정을 소개하고 있는데요, 그 과정은 아래와 같습니다.
► 10X BglII buffer component
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여기서 제가 이해에 여러움을 겪은 부분은, 'reaction final volume'입니다.
buffer는 restriction enzyme의 양에 따라 달라져야 할 것이고 enzyme은 DNA의 양에 따라 달라져야 할 것이기 때문에, 필요 buffer volume은 결국 두 요인에 따라 결정될 것이라는 생각을 하고 있습니다.
그러니까, DNA의 양과 enzyme의 양에 따라 buffer를 맞춰야 한다고 생각했습니다.
그런데 교재에서 각 단계를 설명하면서 '반응을 위한 적절한 final volume은 20㎕일 것이므로 2㎕의 10X BglII buffer를 넣어야 한다
(A suitable final volume for the reaction mixture would be 20㎕, so 2㎕ of 10X BglII buffer is added to the 16㎕ of DNA already present.)'
고 간단히 언급해서, DNA의 양과는 상관이 없는 것 처럼 들렸습니다.
교재에서는 처음부터 final volume을 20㎕로 설정한 것으로 보이는데,
그럼 결국 처음부터 결정된 final volume을 가지고 그 조건에 맞추어 실험을 진행하는 것처럼 이해가 되었습니다.
실험을 자주 경험한다면 쉽게 해결할 수 있을 것 같은 질문이지만, 비대면 수업으로 인해서 학과 실험수업이 모두 온라인으로만 이루어지는 바람에 정보를 얻기가 힘듭니다...
다소 사소하고 부끄러운 질문이지만, 혼자 찾다가 못 견디고 결국 질문을 올립니다.
항상 감사드립니다.
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