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 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
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질문 rna 가 너무 안뽑히는데 왜그럴까요ㅠㅠ
올챙이좀잘하자아(대학생)  | 10.14 14:10

원래 농도가 1000-1200ng/ul 는 항상 나왔는데요 순도가 안좋더라도요

 

근데 6개월 후에 실험 다시 하는데 그때 부터 결과가 너무 안나와요

농도도  500-800 ng/ul 로 나오고 순도도 260/280은 잘맞는데

260/230 이 1.4-1.8로 나옵니다 ㅠ 저희는 2.0-2.2 사이로 사용하거든요

대체 뭐가 문제일까요 ㅠ 상층액도 잘딴다고 생각하거든요

마지막에 알콜로 넣고나서 건조 2-3h후에 rnase free water 30ul 넣고 나노드롭 으로 측정합니다....

 

알콜 건조시킬때 흄후드에서 안하고 지금 고장나서 이동식 후드 틀어놓고 건조시키는데 그거때문인지 ㅠ

#rna
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  10.14 14:54  

건조는 어떤 후드를 사용해도 잘 말랐는지 확인 후 녹이면 아무런 문제가

없습니다.

요즘 RNA work을 하는 lab에서 전기영동으로 확인을 잘 안하는 것 같던데

전기영동으로 확인하는 것이 흡광도 보다 더 RNA quality 확인에 좋습니다.

lab에서 260/230을 2.0-2.2 사이로 사용한다면 좀더 조심해서 추출하는수

밖에 없습니다.

230이 높은 건 시약 성분이 남아있을 가능성이 있지만 어떤 단계에서 문제가

있는지 찾기 힘들며 각 단계 별 정확히 진행해야겠죠.

개구리엑스트라  |  10.14 17:06  

제가 있던 실험실에서는,

70%에탄올 워싱, down해서 RNA pellet이 모이면 부어서 상층액을 버립니다.

aspirator(sucktion)를 이용해서 RNA pellet이 빨리지 않도록 조심히~~남아 있는 에탄올을 흡입시켜주고, 그대로 10분간 말려줍니다. 그리고 DEPC water로 녹여주고, 얼음 10분 방치 후 나노드랍으로 잽니다. 260/230 2.0정도로 준수하게 나왔습니다..

 

랩실에서 에탄올 흡입시켜줄 때 펠렛도 같이 흡입될까봐 조마조마 했지만~ 손이 익으니 안빨리고 잘 되더라구요.

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