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dot blot은 장비가 필요없습니다.
1. membrane은 PVDF, nitrocellulose 모두 가능하니다.
2. 항원은 희석 농도 별 몇개를 찍어 보세요.
3. blocking은 안해도 됩니다.
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레벨1
테스형
(대학원생)
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20.10.12 16:25
SPEED 님!!
빠른 답변 감사합니다.
답변보고 궁금한게 있습니다.
항원을 찍어보라는 말씀이,
단백질을 찍어서 1차항체 2차항체 다 붙여 보라는 말씀이신가요??
1차 항체를 test하려면
항원 -> 1st 항체 -> 2nd 항체 순으로 해야 합니다.
1st 항체와 2nd 항체 결합만 보려면
1st 항체 -> 2nd 항체만 하면 됩니다.
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레벨1
테스형
(대학원생)
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20.10.12 16:46
감사합니다!
한가지만 더 여쭤보고 싶습니다.
항원을 붙일때 웨스턴할때와 마찬가지로, sample을 mercaptoethanol 들어간 버퍼랑 섞어서 100도에 5분 끓여서 찍으면 되는건지,
아니면 그냥 농도별 희석된걸 그대로 찍으면 되는지 궁금합니다.
ㅜㅜ미리감사드립니다.
항체가 protein의 서열상 linear한 peptide를 인식하는 항체라면(western blot만 가능한 항체일 경우) denaturation 후 진행하시는게 좋습니다.
1. protein의 linear한 부분은 항체 생산에서 epitope으로 거의 작용하지 않습니다.
2. SDS-PAGE sample buffer를 처리해도 직선으로
변성되지 않습니다.
SDS의 음이온화 및 이황화결합만 끊어줍니다.
3. 항체 생산시 작은 분자로 자르는 경우는 있지만
변성시켜 직선으로 만들지 않습니다.
따라서 원래 항체는 native form하고도 결합을 잘합니다.