실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Purification/Isolation
DNA extraction에 관련해 질문드립니다.
레벨1 호또 (대학원생)
안녕하세요 이제 막 한 달이 되어가는 대학원생입니다.
-글쓰기 앞서 너무 글이 장황해 한 줄 요약하겠습니다.
1XTE RNase에서 TE buffer에 들어가는 Tris-HCl의 pH별 차이 (7.5와 8.0)
DNA extraction을 하는데 처음과 두 번째에는 결과가 잘 나왔습니다. 3번째에서 그 이후 지금까지 계속 결과가 엉망진창으로 나옵니다. 여기서 달라진 점은 1X TE RNase를 제가 만들어서 사용한 것 밖에 없습니다.
1번, 2번째 실험 때는 다른 선생님이 만들어두셨던 1XTE RNase를 사용했습니다. 얻어 쓰기 죄송스러워서 만들어 사용하려고 제조했습니다.
TE RNase에서 TE 버퍼를 만들 때 1M Tris HCl(pH 8.0) 50ml와 0.5M EDTA(pH 8.0) 10ml 그리고 증류수 440ml를 넣어 만들고 TE buffer와 RNase를 200:1의 비율로 만들어 사용했습니다.
그런데 다른 선생님께서 사용하시는 TE buffer의 pH를 확인해보니 Tris-HCl의 pH를 7.5로 사용하셨던데 대학원 선배에게 물어보니 상관이 없을거라고 했습니다. 그런데 계속 결과가 이상하게 나와 이게 문제가 아닌가 싶습니다. 혹시 Tris-HCl의 pH가 결과에 영향을 미치나요?
260/230의 수치가 낮게 나오면 다른 시약의 제거가 제대로 안된거라고 알고있습니다. 그래서 낮은 수치가 나오고 나서 더 워싱에 집중하고 노력했는데도 값이 도통 오를 기미를 보이지 않습니다.. 제 테크닉의 문제일까요?
근데 그렇다면.. 8번의 extraction동안 동일하게 진행했는데 첫번째 두번째는 되었고 왜 3번째부터 지금까지 엉망인걸까요..
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