실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
RNA extration
레벨1 TmC (대학원생)
안녕하세요 초보 대학원생입니다.
오늘 Raw264.7 cell을 이용하여 RNA 추출 후 cDNA를 합성하려고 했지만
isopropyl alcohol넣고 원심분리 후 pellet을 확인 하니 pellet이 하나도
확인이 안되서 이렇게 질문 올립니다.
cell 농도는 1X106cell/well로 seeding 하였으며
24시간 배양후 sample처리를 하고
24시간 뒤에 co2배양기에서 꺼내 사용하였습니다.
그후 trizol 1ml 을넣고 5분간 상온에 나두고 chloroform 200 μL을 넣고고 vortexing 후
12,000 rpm에서 4℃, 15분간 원심분리 후
상등액을 400 μL씩 따고 isoprophyl alcohol을 400 μL 넣고 상온에 10분 방치후 다시
12,000 rpm에서 4℃, 10분간 원심분리 하였습니다. 그리고 제가 다른 실험도 같이 진행하고 있어서 원심분리 종료 후 원심분리기 안에 약 10~15분 정도 놓고 꺼내서 pellet을 확인 하려니까 하나도 보이지 않았습니다.
혹시 그 10~15분 사이에 때문에 혹시 pellet이 보이지 않는걸까요?
선배님들의 가르침 부탁드립니다.
Bio마켓 프리미엄