실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Purification/Isolation
DNA추출관련
레벨1 솔잎 (대학원생)
1. 시료를 액체질소에 분쇄해서 튜브에 담는다. 시료량 300µL
2. 1000µL CTAB extraction buffer( 2% CTAB, 100mM Tris-Hcl PH8.0, 1.4M Nacl, 20mM EDTA); 100µL Sarkosyl extraction buffer(10% laurylsarcosine, 100mM Tris-Hcl pH 8.0, 20mM
EDTA), 10µL 2-mercaptoethanol 첨가 후 voltex, 1시간 65도 aliquot
3. 500µL 24:1 chloroform: isoamylalchohol 첨가 후 voltex, 원심분리 18000, 5분
4. 상층액을 새 튜브로 옮긴다.
5. 단백질 막이 제거될때까지 반복한다.
6. 2~3배의 cold iso-propanol을 첨가하고 ice에 15분.
7. 원심분리 18000 5분-DNA침전
8. 상층액을 버리고, pellet을 70% ethanol로 씻고 원심분리 18000 1분.
9. pellet을 공기에 건조
10. 280µL 0.1mM Tebuffer(1.0mM Tris-Hcl pH 8.0, 0.1 mM EDTA), 20µL 3M ammonium acetate, 3.5µL RNase
11. 65 도 60분
12. 1mL 100% ice-cold ethanol 첨가한 후 ice에서 15분 흔든다.
13. 원심분리 18000 3분. 상층액을 버리고 공기 건조.
14. 증류수 50µL을 첨가한다
위 방법대로 Total DNA를 추출중인데 전기영동을 시켰을때 밴드가 없네요. 3번째 실험했는데 모두 실패했어요.
나노드랍으로 농도를 측정하니 100정도 나왔는데 문제가 뭘까요?
시료는 엽질이 두터운 상록성 식물입니다.
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