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실험을 진행하실때 Beta-actin과 같은 house keeping protein도 함께 진행하셨겠죠? 일반적으로는 house keeping protein과 Total form의 밴드 형태가 일치한 형태로 나타나야 합니다. 이렇게 나온 상태인가요? 이게 없으면 정량상의 문제인지, 아니면 다른문제인지 알 수 없습니다.
역으로 생각하면 동량의 akt가 있다고 가정했을때 p-akt 가 높다고 생각할수 있겠네요..
혹시 drug treament에 의한 효과를 보시려고 한다면 toxicity를 확인해 보셔도 좋을거 같습니다.
pAkt의 시그널을 오해 없이 제대로 분석 하셨는지 궁금합니다.
Starvation의 유무도 영향을 줄 수 있고 Starvation 시 pAkt의 basal level expression은 굉장히 낮습니다.
sample 회수시 lysis buffer에 존재하는 phosphatase inhibitor가 working하지 않은 것으로 생각 됩니다.
그것이 아니라면 phospho Akt antibody가 제 역할을 하지 못하여 total Akt를 같이 잡는 경우도 있구요.