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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 western blot 실험 시 phospho form과 total form
알룰루라(대학생)  | 09.29 00:24

western blot 을 이용해서 실험을 했는데

AKT와 pAKT의 신호를 확인하였습니다.

phospho AKT의 발현양에는 변화가 없었는데 total AKT만 발현양이 줄어드는 것은 무엇을 의미하는 것인가요?

total이 변화가 없지만 phospho만 줄어드는 것은 이해가 가는데 그 반대는 이해가 가지 않습니다.

선배님들 도와주세요

#웨스턴블롯
 
#western blot
 
#phospho
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이제이하이  |  09.29 09:30  

실험을 진행하실때 Beta-actin과 같은 house keeping protein도 함께 진행하셨겠죠? 일반적으로는 house keeping protein과 Total form의 밴드 형태가 일치한 형태로 나타나야 합니다.  이렇게 나온 상태인가요? 이게 없으면 정량상의 문제인지, 아니면 다른문제인지 알 수 없습니다.

개구리bio  |  09.29 10:11  

역으로 생각하면 동량의 akt가 있다고 가정했을때 p-akt 가 높다고 생각할수 있겠네요..

혹시 drug treament에 의한 효과를 보시려고 한다면 toxicity를 확인해 보셔도 좋을거 같습니다. 

알C3G  |  10.03 03:48  

pAkt의 시그널을 오해 없이 제대로 분석 하셨는지 궁금합니다.

Starvation의 유무도 영향을 줄 수 있고 Starvation 시 pAkt의 basal level expression은 굉장히 낮습니다. 

앞다리포르말린  |  10.07 14:38  

sample 회수시 lysis buffer에 존재하는 phosphatase inhibitor가 working하지 않은 것으로 생각 됩니다.

그것이 아니라면 phospho Akt antibody가 제 역할을 하지 못하여 total Akt를 같이 잡는 경우도 있구요.

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