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질문 *B16F10이용 a-MSH assay 프로토콜 확인해주세요*
알준돌이1(대학생)  | 09.21 19:24

안녕하세요 현재 B16F10세포를 이용하여 a-MSH Assay 진행중인 학생입니다ㅠㅠ

제가 요 며칠간 많은 논문을 읽고 프로토콜을 정리후 실험을 진행하였으나 결과가 좋지 않아 문의드립니다! 고수님들 읽고 답변해주시면 감사하겠습니다!

1. 저는 MTT Assay 를 진행하고 있으며 이와 같은 농도로 MSH Assay를 진행하였을시 시료가 독성을 띄어 세포가 저해될 확률이 있나요?  

  1-1)그렇다면 고수님들은 농도를 몇으로 지정하여 실험을 진행하시나요?ㅠ

2. 저는 96well plate를 이용하여 현재 3well을 모아서 쓰는데, cell 수를 1*10^5로 지정하였습니다. 근데 생각보다 모이는 세포수가 적은데 혹시 Cell seeding 시 cell 수를 몇으로 지정하시나요?

3. cell 이 자란후 MSH를 처리할때 처리후 보통 몇일이 지나면 추출물을 주입한나요? 

  3-1) 어떤 논문에서는 MSH와 추출물을같이 주입한다고 하더군요 ㅠㅠ

4. cell collection시에 trypsin으로만 진행하시나요?

   4-1)근데 그러면 마지막에 흡광도 찍을 시에 trypsin이 완전히 suction되지 않

        으면 흡 광도에 차이가 생기지 않나요?

5. cell collecting 후 용해 시 1N NaOH 에 10 % DMSO가 들어간 용매로 80도에서 1시간 용해 하였는데 프로토콜에 문제가 있나요?

 

고수님들의 친절한 답변 기다리겠습니다 감사합니다ㅠㅠㅠㅠㅠ

#a-MSH assay
 
#B16F10
 
#melanin
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