실험 Q&A Cell Biology > Differentiation/Proliferation
3T3-L1 미분화군과 분화군에서 PCR 발현 차이가 별로 없어요
레벨2 ㅠ.ㅠ!! (대학원생)
안녕하세요
3T3-L1으로 지방 분화 실험을 하는 학생입니다.
Bric 선생님들의 도움으로 3T3-L1 분화 하는거까지는 성공을 했는데요,
세포 harvest후 PCR로 측정했을때 MDI 처리 안한 정상군과 MDI만 처리한 군에서의 유전자 발현 차이가 크지 않아요
논문들 보면 MDI 처리 안했을 때 대부분의 유전자들이 발현하지 않던데
제껀 왜 차이가 별로 안날까요?
지방분화는 눈에 띄게 차이가 나고, MDI 처리 안했을 때는 지방이 거의 없습니다.
측정한 gene은 PPAR-r, FAS, LPL, CPT-1이고, PPAR-r에서도 MDI군을 1로 봤을때 미분화군이 0.4-5 정도로 발현이 됩니다.
FAS나 LPL은 미분화군에서 0.6-7정도로 발현이 많이되구요
심지어 CPT-1에서는 미분화군이 아주아주 높게 나옵니다 (10배 이상)
근데도 이렇다면 primer를 다시짜서 해보는게 제일 빠른 방법일까요? ㅠㅠ
PCR은 qPCR 장비 이용해서 사용하고있고 SYBR green 형광 이용해서 측정합니다.
Melting curve로 확인했을때 dimer도 없었고, 곡선도 일정했습니다.
Bio-rad에 primer 검토도 받아서 진행한거예요..ㅠㅠ
왜이러는걸까요? 도와주세요ㅠㅠ
혹시 몰라서 지방 분화된 사진 같이 첨부합니다.
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