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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
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질문 stable cell line selection질문입니다.
알Herseptin(대학원생)  | 09.21 08:38

안녕하세요 석사 2차 재학중인 학생입니다. 이번에 pLKO.puro vector를 사용해서 shRNA를 만들고 lentivirus를 이용하여 stable cell line을 제작하고 있습니다. packaging dna랑 envelope dna로는 pMD2와 psPAX2를 사용하고 있고 293T 6well에 viral transfection진행했고 이틀뒤 PC3와 DU145에 Infection 진행했습니다. 이때 polybrene도 사용했고 2' Infection 후 1ug/ml 농도의 puromycine media를 첨가하여 selection을 진행하는데 이틀까지는 control cell(non-Infected)이 70% 이상 죽은것을 확인했고 Infection을 진행한 cell은 50%이상 생존함을 확인했습니다. 이후 같은 농도의 puromycine media change 후 12시간만 지나면 control과 Infecion을 진행한 cell 모두 죽어버립니다... 두번째 selection과정에서 cell이 다 죽어버리는데 어디서 문제가 발생했는지 모르겠습니다.. 의견 남겨주시면 감사하겠습니다!

#stable cell
 
#Infection
 
#selection
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리bio  |  09.21 08:43  

렌티 바이러스 타이터를 확인하셨나요?

바이러스가 제대로 만들어지지 않은것으로 보여집니다. 

보통 cont은 거의 다 죽고 lenti는 많이 살아야 하는데 50% 70%는 큰 차이가 없는 것으로 보여집니다. 

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