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DNA digestion 프로토콜
레벨1 phy0681 (과기인)
DNA digestion과 관련하여 질문드립니다.
Cell lysate에서 DNA를 추출한 뒤 DNA digestion을 실시하려고하는데,
프로토콜을 확보하기가 어렵네요.
Kit 설명서에는 아래와 같이 나와있습니다.
"Digest DNA using nuclease P1 following the manufacturer’s
instructions. Adjust pH to 7.5 - 8.5 using 1M Tris. Add 1 unit of
alkaline phosphatase per 100 μg of DNA and incubate at 37°C
for 30 minutes. Boil for 10 minutes and place on ice until use."
여기에서 nuclease P1 및 alkaline phosphatase를 녹일때 사용하는 희석용액이 궁금합니다. (자세하게 나와있는 프로토콜을 발견하기 쉽지않네요. 일부 논문들에 나와있는 방법을 참고하려고 했더니 프로토콜이 각각 달라서요^^;; 참고로 보유하고 있는 nuclease P1은 Sigma N8630, alkaline phsphatase는 Sigma #P5931 입니다. )
DNA 추출 후 nuclease P1(from Penicillium citrinum) 및 alkaline phosphatase를 이용해 DNA digestion 경험이 있으신 분 도움 부탁드립니다.
즐거운 하루 보내세요.
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