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질문 DNA digestion 프로토콜
알phy0681(과기인)  | 09.18 22:29

DNA digestion과 관련하여 질문드립니다.

Cell lysate에서 DNA를 추출한 뒤 DNA digestion을 실시하려고하는데,

프로토콜을 확보하기가 어렵네요.

Kit 설명서에는 아래와 같이 나와있습니다. 

"Digest DNA using nuclease P1 following the manufacturer’s
instructions. Adjust pH to 7.5 - 8.5 using 1M Tris. Add 1 unit of
alkaline phosphatase per 100 μg of DNA and incubate at 37°C
for 30 minutes. Boil for 10 minutes and place on ice until use."

여기에서 nuclease P1 및 alkaline phosphatase를 녹일때 사용하는 희석용액이 궁금합니다. (자세하게 나와있는 프로토콜을 발견하기 쉽지않네요. 일부 논문들에 나와있는 방법을 참고하려고 했더니 프로토콜이 각각 달라서요^^;; 참고로 보유하고 있는 nuclease P1은 Sigma N8630, alkaline phsphatase는 Sigma #P5931 입니다. )

DNA 추출 후 nuclease P1(from Penicillium citrinum) 및 alkaline phosphatase를 이용해 DNA digestion 경험이 있으신 분 도움 부탁드립니다.

즐거운 하루 보내세요.  

#DNA digestion
 
#nuclease P1
 
#alkaline phosphatase
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  09.18 23:03  

nuclease P1은 RNA나 ssDNA와 같이 단일가닥 핵산을 자르기 때문에 분리한

dsDNA에 처리해도 반응이 일어나지 않습니다.

alkaline phosphatase는 DNA 5' 말단의 인산을 제거하기 때문에 DNA를 분해하는

효소는 아닙니다.

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