실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > Purification/Isolation
RNA 추출시 RNA degradation이 일어나는 문제가 있습니다.
레벨3 닉네임0115 (대학원생)
안녕하세요, RNA 추출을 하고있는 대학원생입니다.
An optimized grapevine RNA isolation procedure and statistical determination of reference genes for real-time RT-PCR during berry development
라는 논문의 protocol에 따라 Isopropanol+LiCl의 방식으로 회색곰팡이를 접종한 딸기에서 RNA를 추출하고 있습니다.
그런데 이제 RNA가 뽑히긴 하는데 자꾸 분해되어 뽑혀서 RNAse activity를 최소화하기 위해서 구매한 시약 제외하고 제가 만든 용액(CTAB extraction buffer, 3M NaOAc, 10M LiCl, 70% EtOH 제조시에는 멸균수 이용)을 모두 autoclave하고 저온에서 활성이 낮다 하여 처음 lysis과정을 제외하고는 모두 ice위에서 하고 4도에서 centrifuge했습니다.
그렇게 했는데도 RNA가 분해되어서 혹시 다른 의심되는 개선할만한 과정이 있는지, 아니면 sample의 상태를 의심하고 새로운 sample로 다시 해보는 게 맞는지 조언 부탁드립니다.
감사합니다.
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