[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 sale 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
과학기술용어에 대한 과기인 인식조사 결과보고서
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
조회 156  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 RNA 추출시 RNA degradation이 일어나는 문제가 있습니다.
뒷다리닉네임0115(대학원생)  | 09.18 17:51
첨부파일 파일첨부: RNA 추출 CTAB+Licl.JPG (16 KB)
이미지 첨부파일

안녕하세요, RNA 추출을 하고있는 대학원생입니다.

An optimized grapevine RNA isolation procedure and statistical determination of reference genes for real-time RT-PCR during berry development

라는 논문의 protocol에 따라 Isopropanol+LiCl의 방식으로 회색곰팡이를 접종한 딸기에서 RNA를 추출하고 있습니다.

그런데 이제 RNA가 뽑히긴 하는데 자꾸 분해되어 뽑혀서 RNAse activity를 최소화하기 위해서 구매한 시약 제외하고 제가 만든 용액(CTAB extraction buffer, 3M NaOAc, 10M LiCl, 70% EtOH 제조시에는 멸균수 이용)을 모두 autoclave하고 저온에서 활성이 낮다 하여 처음 lysis과정을 제외하고는 모두 ice위에서 하고 4도에서 centrifuge했습니다.

그렇게 했는데도 RNA가 분해되어서 혹시 다른 의심되는 개선할만한 과정이 있는지, 아니면 sample의 상태를 의심하고 새로운 sample로 다시 해보는 게 맞는지 조언 부탁드립니다.

감사합니다. 

#RNA추출
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  09.18 18:37  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

방법에 문제가 있는지 시료에 문제가 있는지 정상적인 딸기로 추출해 보세요.

뒷다리닉네임0115  |  09.24 13:01  
첨부파일 파일첨부: 0001.JPG (49 KB)
이미지 첨부파일

먼저 채택이 늦어서 죄송합니다 실험을 다시 해본다고.....

맨 왼쪽 ladder, 왼쪽 2개 정상적인 딸기, 오른쪽 2개 접종한 딸기인데 이번에는 RNA 2band가 보이기는 하는데 degradation이 된 게 조금 보이더라고요...그런데 이정도 quality면 PCR에 쓰기에는 아직 부족하겠죠?

대왕개구리SPEED  |  09.24 13:06  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

상태가 좋다고는 말하기 힘들것 같습니다.

RNA 추출 방법을 좀더 최적화 해야할 것 같습니다.

고분자 band도 나오는것 같고 양이 적어도 깨끗하게 나오는게 좋습니다.

예비 실험으로 qPCR 까지해서 RNA 추출 단계 이후 문제가 발생하는지도

한번 확인해 보세요.

 

뒷다리닉네임0115  |  09.24 13:46  

네 일단 1번만 더 추출해보고 qPCR까지도 해볼게요! 감사합니다

답변하기
할인행사 광고 검색광고
코람바이오텍 코람바이오텍
[Proteintech] 2020 마지막 전품목 이벤트! (12.28까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
무료 샘플로 명품 NEB의 DNA/RNA Purification 성능을 경험하세요. / NEB RNA Mar.. (11.5까지)
코람바이오텍 코람바이오텍
[Cell Signaling Technology] 3+1 할인 행사! (12.31까지)
뷰키코리아 뷰키코리아
신제품 출시 기념! 최신형 병렬 증발 농축기 구매 시 정품 칠러 무상증정 이벤트! (12.31까지)
하나과학 하나과학
Socorex 2020 BIG SALE event - Socorex Acura manual micropipe.. (1.31까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
[에펜도르프코리아] Eppendorf 2020 하반기 프로모션 행사 : 실험실 필수품 피펫,원심분리기,PCR.. (12.31까지)
인성크로마텍 인성크로마텍
Phenotype MicroArray™ - Live Cell 에너지 대사 & 감수성 프로파일링 (10.31까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
TECAN 한국대리점 20주년 기념 Microplate Reader & Washer 할인이 쏟아진다! (12.31까지)
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
sale
2/6  좌우
793,400753,800
555,000
136,000
158,40047,600
50,00015,000
242,40072,800
388,500116,600
79,50075,600
238,70071,700
22,7006,900
201,30060,400
924,000
379,000
139,000132,100
136,000129,200
245,20073,600
246,60074,000
887,200266,200
80,40024,200
230,000
143,800136,700
739,000702,100
309,000
47,20044,900
최근등록   더보기 >
Transient expression vector는 나중에 다 분해되어 없어지나요?   10.23
멸균주사용수로 이용한 제조 PV   10.23
STZ를 cell에 treat하는법이 궁금합니다...   10.23
SDC 5% 버퍼로 lysis 후 95C에 끓이는 과정에서 침전합니다   10.23
Diafiltration 중 permeate의 conductivity 상승   10.23
제조소 관련 SOP 작성   10.23
muscle tissue section이 잘 안됩니다....   10.23
PCR product의 band density가 갑자기 떨어지는건 무슨 원인이 있을까요?   10.23
크로마토그래피 rapid test 만들때 line찍는 법   10.22
Autophagy 와 Rad51   10.22
Terumo bct
실험관련연재
박은총 연재중후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
Mr.S 연재중의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재중실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
이제욱 연재중생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
에펜도르프코리아 광고