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cloning 한 효소로 잘라서 비교할 때 ligation에 사용한 vector와 insert를
같이 전기영동 해서 비교해 보세요.
insert 크기가 다르다면 cloning이 안된 것으로 봐야 합니다.
전기영동 문제는 사진을 첨부하는 것이 문제 해결에 도움이 됩니다.
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레벨2
나방개
(과기인)
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20.09.18 16:42
파일첨부처럼 나왔는데 제대로된 실험결과가 나오려면 어떻게 하는게 좋을까요?듣기론 PCR에서 뭘 새롭게 짜야할거 같다고 들은거 같습니다...
두번째가 vector, 세번째가 insert를 같은효소로 자른것입니다.
insert band가 2개인 이유가 있나요?
확인할 때 사용한 효소가 cloning에 사용한 효소인가요?
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레벨2
나방개
(과기인)
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20.09.18 17:07
cloning에 사용한 효소는 EcoR1을 사용하였고 지금 사용한 효소는 Kpn1효소입니다. insert 밴드가 두개인 이유는 insert의 정방향, 역방향여부를 알기위함입니다.
insert정방향으로 나오게 하려면 어떻게하면 좋을까요?
전기영동에 사용한 12개 colony는 EcoR I으로 확인한 결과 모두 정상적으로
cloning이 된 colony인가요?
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레벨2
나방개
(과기인)
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20.09.18 17:24
EcoR1처리 때는 제대로 값이 나왔습니다.
이런 경우 확률은 50 대 50인데 정상적인게 하나도 안보이네요.
그리고 잘린 vector를 보니 3종류인데 EcoR I에서 모두 정상적일 수가 없습니다.
primer와 관계는 없고 colony가 남아 있으면 prep. 해서 확인해보고 colony가
없으면 다시 ligation, TF하는 것이 좋을 듯 합니다.
colony를 prep.하지 말고 vector에 primer, insert에 primer를 만들어 colony PCR해서
정뱡향 colony를 찾아도 됩니다.
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레벨2
나방개
(과기인)
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20.09.20 20:42
하나 더 궁금한게 있는데 왜 DNA샘플 값 형태가 일자로 안나오고 저렇게 활모양처럼 나오는 이유는 뭔가요???
1. DNA 양이 많은 경우
2. 전기영동 속도가 빠른경우
2가지 경우에서 첨부사진과 같은 현상이 나오는데 DNA양을 줄이면 insert가
거의 안보입니다.
좀더 천천히 내리면 괜찮아 집니다.