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HPLC 피크 분리를 위한 gradient 조성 변경 조언 부탁드립니다
레벨1 Kaya Jam (대학생)
안녕하세요!
저번에 동일한 질문으로 글 올렸었는데 답변 달아주셔서 감사합니다.
상세 크로마토그램과 HPLC 조건을 첨부드립니다!
피크가 상당수 겹쳐서 gradient를 어떻게 더 조정하면 좋을지 조언 해주시면 감사하겠습니다.
총 12가지 성분을 분리하려 합니다.
총 runtime은 16분이고, x축은 2분 단위로 숫자 표기되어 있습니다.
표기한 것처럼 5분 초반대와 10분 초반대에 두 피크가 아예 동시에 겹치고, 6.5분대와 11분 전후로 두 피크가 겹치는 양상을 보입니다.
(10분 후반~12분 초반의 잔피크는 다른 성분에 의한 것이어서 무시 부탁드립니다... 저 성분은 standard 물질을 아예 바꿔볼 생각입니다.)
현 gradient 조건은 이렇습니다.
Min | ACN % | Buffer % |
0 | 0 | 100 |
1 | 0 | 100 |
2 | 5 | 95 |
6 | 10 | 90 |
8 | 22 | 78 |
9 | 50 | 50 |
10 | 70 | 30 |
13 | 70 | 30 |
13.5 | 90 | 10 |
14.5 | 90 | 10 |
14.8 | 0 | 100 |
16 | 0 | 100 |
column: Zorbax SB C18 3.5um*4.6mm*150mm
pre-column: Zorbax SB C18 5um*4.6mm*12.5mm
Buffer: Ammonium acetate 20mM (pH 6)
Flow rate: 1mL/min
Detector: DAD
Injection vol.: 10ul
Column temp.: 30C
지난 번 8 분의 분석시간과 거친 gradient 비율을 이번에 좀 더 세세하게 나누고 분석 시간을 늘려서 나온 결과인데(본문 크로마토그램), 좀 더 조정이 필요할 것 같습니다.
겹치는 부분의 ACN 비율을 좀 더 세세히 조정하면 해결되는 문제일까요?
참고로 분석 시간은 최대 20분을 넘기지 않길 희망하고 있습니다...ㅠㅠ 물질이 워낙 산화가 잘되어서 분석시간이 길면 길수록 크리티컬 해서요.. (분석시간을 늘리는 것이 불가피하다면 어쩔 수 없지만요...)
조언 부탁드리겠습니다.
감사합니다!
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