실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Transformation
transformation efficiency를 알아보기 위한 control 그룹 설정에 관해서 질문입니다.
레벨1 kim.yg (대학생)
인서트를 넣어 라이게이션한 플라스미드를 Top10에 트렌스포메이션 해서
클로닝 하려고 계획을 세웠습니다.
거기서 제가 플레이트에 배양 후 콜로니 PCR로 인서트가
잘 들어갔는지 확인하고,
결과를 보고 미니프랩을 한다는 계획을 세우고 교수님께 컨펌 받았는데
교수님께선 콜로니PCR은 이피션시가 낮을때,
콜로니 50개에서 1~2개 나올까 말까할때 하는 방법이고,
실험을 처음 해볼때는 콜로니 PCR보다 먼저 이피션시를 알아보는게
선행되어야 한다고 하시며
인서트를 넣고 라이게이션 한 플라스미드와
컨트롤인 인서트의 양만큼 물을 넣고 라이게이션한 플라스미드를
각각 트렌스포메이션 하고 컨트롤 그룹의 이피션시를 보고
인서트가 들어간 플라스미드를 사용한 그룹의 콜로니를 몃개 선정하여
미니프랩을 하면 된다고 하십니다.
처음엔 아그렇구나 하고 실험실에 와서 잘 생각해보니
이피션시를 본다고 하는데 이부분이 잘 이해가 가지 않습니다.
어떤 이피션시를 말하시는 것인지, 컨트롤그룹의 결과를 보고
판단 한다는 것이 어떤 결과를 어떻게 받아 들여야 할지
혹시 이부분에 대해서 아신다면 설명 부탁드립니다.
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