실험 Q&A Cell Biology > Cell lysis/Apoptosis
Raw264.7 cell NO 실험 중입니다! none(Normal)칸만 셀들이 떨어집니다ㅜㅜ 도와주세요
레벨1 피부약리 (대학원생)
안녕하세요! Raw264.7 세포로 실험하고 있는 석사 학생입니다!
몇일째 계속 cell NO 실험을 하고있는데 none칸에 cell만 탈락되이 되고 있습니다ㅠㅠㅠㅠ
농도는 25, 50, 100, dexamethasone(100)로 하여 총 none, control, 25, 50, 100 , dexamethasone 6가지 농도로 실험을 하고 있습니다
10파이 dish에 처음에는 9*10^5로 seeding을 하였고, 24시간 후에 sf배지로로 washing을 한번하고 9ml을 넣은 후, sample을 농도별로 1mL넣고 control칸과 none칸은 sf배지를 1mL을 넣었습니다! 그리고 바로 LPS를 10마이크로 처치를 한 후 인큐베이터에서 18시간 넣어둔 후 상층액을 100마이크로 따서 시약과 함께 반응시켰습니다!
그런데 상층액을 따기위해 꺼냈을 때 none칸만 떨어지더라구요,, control칸과 sample칸은 떨어지지 않고 배지만 노랗게 되었고, none칸과 control칸의 흡광도는 4배 가까이 뛰었습니다!
셀이 많다는 조언을 들어서 6*10^4, 5*10^4로 하여 seeding을 해보았는고, 실험방법은 동일하나 seeding후 18시간 부착하고 sample처치와 LPS처치를 하였습니다
결과는 none칸이 3/4정도로 조금 남아있고 control과 sample칸은 떨어지지 않았습니다..문제는 none칸이 떨어지기도 했고,,원래 NO활성이 있던 sample이 활성이 나타나지가 않았습니다. control과 none칸의 흡광도 차이는 2배정도로 줄었구요
cell NO실험을 할 때 none칸이 왜 떨어지는 걸까요?ㅠㅠ 그리구 cell양에 따라서 sample의 활성의 차이도 있을까요?
단백질정량을 해야하는데 3주째 못하고있습니다..ㅠㅠㅠ제발 도와주세요 감사합니다
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